| Isolation, Culture and Differentiation of Adult Hippocampal Precursor Cells
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] There are two neurogenic niches in the adult mammalian brain: the subventricular zone of the lateral ventricle and the subgranular zone of the hippocampal dentate gyrus. Cells from these areas can be isolated and maintained in vitro, using two different culture systems to assess their potential regarding proliferation and differentiation in a reductionist model. While the neurosphere assay is primarily performed to directly study the proliferative and differentiation potential of cells in individual brains, the monolayer culture allows single cell analysis in a rather homogeneous cell population. Here, we describe the isolation, culturing methods and differentiation of neural precursor cells in both systems.
[摘要] 成年哺乳动物脑中有两个神经生态位：侧脑室下脑室区和海马齿状回颗粒下区。 来自这些区域的细胞可以在体外分离和维持，使用两种不同的培养系统评估它们在还原模型中的增殖和分化的潜力。 虽然神经球测定主要是为了直接研究个体脑中细胞的增殖和分化潜能，单层培养允许在相当均匀的细胞群中进行单细胞分析。 在这里，我们描述了两个系统中的神经前体细胞的分离，培养方法和分化。
【背景】在哺乳动物脑中，成人神经干细胞存在于两个主要神经生态位中，即海马齿状回（DG）的下颗粒区（SGZ）和室下区（SVZ）的侧脑室，其允许新生神经元成人的大脑。来自神经生态位的神经前体细胞可以在体外分离和培养以模拟细胞过程，尤其是增殖和分化。两种标准培养系统，贴壁单层培养（Palmer等人，1995; Ray等人，1995）和神经球测定（Reynolds和Weiss，1992和1996 ）在20世纪90年代被引入，代表了在体外研究神经祖细胞生物学的有价值的工具。
根据研究问题，每个系统都有其优点和缺点，在选择其中一种或另一种培养方法之前应该仔细考虑。在贴壁单层培养中，细胞生长相当孤立，形成更均匀的培养物。单层允许直接调查和监测单细胞水平的神经前体细胞。受控条件下的形态，增殖和分化等特征可以很容易地分析和可视化。然而，与神经球培养物相比，以单层培养的细胞代表更复杂的模型，因为细胞通常以更少的通常存在于细胞壁中的细胞 ...
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| An in vitro Model of Neuron-macrophage Interaction to Generate Macrophages with Neurite Outgrowth Properties
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Macrophages are known to play beneficial roles in axon regeneration after nerve injury. To develop an in vitro model in which injury signals can elicit pro-regenerative macrophage activation, we established co-cultures consisting of adult dorsal root ganglia sensory neurons and peritoneal macrophages and added cAMP analogue dibutyryl cAMP. The conditioned medium collected from the co-cultures exhibited robust neurite outgrowth activities. The neurite outgrowth activities were almost completely abrogated by addition of minocycline, a macrophage deactivator, indicating that factors responsible for neurite outgrowth are produced by activated macrophages.
[摘要] 已知巨噬细胞在神经损伤后的轴突再生中发挥有益作用。 为了开发一种体外模型，其中损伤信号可以引发再生巨噬细胞活化，我们建立了由成体背根神经节感觉神经元和腹膜巨噬细胞组成的共培养物，并加入cAMP类似物二丁酰基cAMP。 从共同培养物收集的条件培养基表现出强烈的神经突生长活动。 通过添加米诺环素（巨噬细胞减活剂）几乎完全消除神经突生长活动，表明负责神经突生长的因子是由活化的巨噬细胞产生的。
【背景】成年哺乳动物的CNS神经元在损伤后不会自发再生轴突。 预处理周围神经损伤允许背根神经节（DRG）感觉轴突通过促进再生相关基因的表达来再生中心分支。 我们以前已经表明，预处理损伤后DRG中的活化巨噬细胞有助于提高DRG感觉神经元的内在再生能力（Kwon等，2013）。 为了确定参与神经损伤后巨噬细胞活化的分子因子，我们开发了体外模型，其中神经元 - 巨噬细胞相互作用由cAMP引起，cAMP是增强神经元再生能力的众所周知的试剂。 与使用酵母聚糖激活巨噬细胞的以前的模型相比，我们的模型在预处理外周损伤模型中使用类似于分子事件的更多的生理刺激。
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