| Transmission Electron Microscopy for Analysis of Mitochondria in Mouse Skeletal Muscle
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Skeletal muscle is the most abundant tissue in the human body and regulates a variety of functions including locomotion and whole-body metabolism. Skeletal muscle has a plethora of mitochondria, the organelles that are essential for aerobic generation of ATP which provides the chemical energy to fuel vital functions such as contraction. The number of mitochondria in skeletal muscle and their function decline with normal aging and in various neuromuscular diseases and in catabolic conditions such as cancer, starvation, denervation, and immobilization. Moreover, compromised mitochondrial function is also associated with metabolic disorders including type 2 diabetes mellitus. It is now clear that maintaining mitochondrial content and function in skeletal muscle is vital for sustained health ...
[摘要] 骨骼肌是人体中含量最丰富的组织，可调节各种功能，包括运动和全身代谢。骨骼肌有很多线粒体，这是ATP好氧生成所必需的细胞器，它提供化学能量来促进收缩等重要功能。骨骼肌中线粒体的数量及其功能随着正常衰老和各种神经肌肉疾病以及癌症，饥饿，去神经支配和固定等分解代谢条件而下降。此外，受损的线粒体功能也与包括2型糖尿病在内的代谢紊乱有关。现在清楚的是维持骨骼肌中的线粒体含量和功能对于整个寿命期间的持续健康是至关重要的。虽然有许多染色方法可用于研究线粒体，但透射电子显微镜（TEM）仍然是研究骨骼肌中线粒体结构和健康的最重要方法。它提供关于线粒体含量，嵴密度，组织，自噬体形成以及在各种疾病状况中经常观察到的任何其他异常的关键信息。在本文中，我们描述了一个详细的协议样本制备和透射电镜分析小鼠骨骼肌线粒体。
【背景】骨骼肌是一种高度塑性的组织，经过响应一些细胞外信号的形态和代谢适应性。包括抵抗或耐力运动在内的许多干扰刺激线粒体生物发生，导致增加的代谢能力和抵抗疲劳（Li等人，2008; Sandri，2008）。相反，在衰老期间，不活动，以及在许多分解代谢疾病状态下，骨骼肌线粒体数量和功能下降，导致易疲劳性和胰岛素抵抗增加（Sandri，2008）。功能失调的线粒体的累积也可能导致进行性活性氧物质诱导的损伤，从而进一步损害骨骼肌中的氧化能力（Bonnard等人，2008）。 ...
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| Quantification of Trypanosoma cruzi in Tissue and Trypanosoma cruzi Killing Assay
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Date:
2017-11-20
[Abstract] Infection with Trypanosoma cruzi causes Chagas disease. The methods provided here allow for the quantification of T. cruzi in the liver, heart, and blood of intraperitoneally-infected mice and analysis of the killing activity of the cells infected with T. cruzi in vitro.
[摘要] 感染克氏锥虫（Trypanosoma cruzi）引起恰加斯病（Chagas disease）。 这里提供的方法允许量化T。 克氏锥虫在感染腹腔的小鼠的肝脏，心脏和血液中分析，并分析克氏锥虫在体外感染的细胞的杀伤活性。
【背景】以慢性心肌病为特征的恰加斯病是由细胞内原生动物寄生虫克氏锥虫感染引起的（Bonney等人，2015年）。拉丁美洲大约有2000万人患有南美锥虫病（里贝罗等人，2012; Flavia Nardy等人，2015），已成为全球性的健康问题由于感染者的迁移（Andrade等人，2014; Garcia等人，2015; Requena-Mendez等人）， 2015年）。已经开发了几种药物，如nifurtimox和benznidazole，用于治疗恰加斯病。然而，这些药物需要服用数月，并有严重的副作用（Viotti et al。，2009）。治疗的主要目的是抑制T。克鲁兹通过血液传播以及防止心力衰竭的发展。因此，定量T的协议。 cruzi 和 T。这里介绍的克鲁兹杀螨试验可能有助于发展南美锥虫病的新型诊断方法和治疗策略。
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| Cryopreservation Protocol for Chlamydomonas reinhardtii
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Date:
2016-11-20
[Abstract] Cryopreservation is commonly used for storing viable cells, tissues, organs or organisms at ultralow temperatures, and usually involves immersion in liquid nitrogen at -196 °C. Here we provide a detailed cryopreservation protocol for C. reinhardtii based on Crutchfield’s work (Crutchfield et al., 1999), with minor changes (Yang and Li, 2016). In this study, we compared the cryoprotection effect of two common cryopreservation agents (CPAs), methanol and DMSO. Furthermore, the two-step cryopreservation process was divided into five stages to study the factors affecting the survival rate at each stage. We found that the use of methanol as the CPA, combined with the cooling process outlined here (cooling from 25 °C to -55 °C at a rate of 1 °C/min), were indispensable for ...
[摘要] 冷冻保存通常用于在超低温度下储存活细胞，组织，器官或生物体，并且通常包括在-196℃的液氮中浸泡。在这里，我们提供了一个详细的cryopreservation协议。基于Crutchfield的工作（Crutchfield et al 。，1999），并进行微小的改变（Yang和Li，2016）。在这项研究中，我们比较了两种普通冷冻保存剂（CPAs），甲醇和DMSO的冷冻保护作用。此外，两步冷冻保存过程分为五个阶段，以研究影响每个阶段的生存率的因素。我们发现使用甲醇作为CPA，结合此处概述的冷却过程（以1℃/min的速率从25℃冷却至-55℃）对于冷冻保存后的细胞存活是不可缺少的。这里描述的解冻过程（在35℃解冻5分钟）对于提高存活率也是重要的。
[背景] 现在，冷冻保存经常用于储存C的转基因品系或突变系。以及涉及该生物体的实验需要。 Morris等人。 （1979）讨论了不同CPA在冷却中的影响，温度和存活率之间的关系，有或没有CPA，和冷却速度。他们发现，加入甲醇后，半致死温度是测试的所有CPA中最低的（-14.4℃），而DMSO的温度为-4.9℃（Morris等人， 1979）。
通过在室温下在7％（v/v）DMSO中储存过夜，随后在-70℃下储存，Johnson和Dutcher（1993）获得了最高的活力，在10℃下接近10％。莱茵哈德文化。然而，存活率可以在C中被限制。特别是在我们使用的细胞系CC-125中，尽管作者的主张是由液体培养引起的，但存活率仅为0.34％。然而，该方法是耗时的并且导致低的细胞存活力。 ...
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