| Virus Binding and Internalization Assay for Adeno-associated Virus
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Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract] The binding and internalization of adeno-associated virus (AAV) is an important determinant of viral infectivity and tropism. The ability to dissect these two tightly connected cellular processes would allow better understanding and provide insight on virus entry and trafficking. In the following protocol, we describe a quantitative PCR (qPCR) based method to determine the amount of vector bound to the cell surface and the amount of subsequent virus internalization based on viral genome quantification. This protocol is optimized for studying AAV. Nevertheless, it can serve as a backbone for studying other viruses with careful modification.
[摘要] 腺相关病毒（AAV）的结合和内化是病毒感染和向性的重要决定因素。 解决这两个紧密相连的细胞过程的能力将有助于更好地了解并提供有关病毒进入和贩运的洞察。 在以下协议中，我们描述了基于定量PCR（qPCR）的方法，以确定基于病毒基因组定量结合到细胞表面的载体的量和随后的病毒内化的量。 该协议针对研究AAV进行了优化。 然而，它可以作为研究其他病毒，仔细修改的骨干。
【背景】评估AAV生物学的研究通常使用转基因表达作为实验终点。 然而，AAV在到达细胞核并转导细胞之前必须成功导航的许多关键步骤。 因此，AAV感染途径中有多个不同的步骤可能会单独或共同破坏，导致改变的转导。 AAV结合和内化的评估是确定小分子细胞修饰，基于CRISPR的基因敲除，基于siRNA的基因敲除或其他实验程序后观察到的转导差异的原因的重要的第一步
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| Mouse Model of Dengue Virus Infection with Serotypes 1 and 2 Clinical Isolates
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Dengue is a global public health threat caused by infection with any of the 4 related dengue virus serotypes (DENV1-4). Clinical manifestations range from self-limiting febrile illness, known as dengue fever (DF), to life-threatening severe diseases, such as dengue hemorrhagic fever (DHF) or dengue shock syndrome (DSS). Most cases of DHF/DSS are associated with secondary heterotypic infections through a phenomenon that is described as antibody-dependent enhancement of infection (ADE). There are an estimated 400 million human infections and several hundred thousand cases of severe dengue occurring yearly. At present, however, there are no approved antiviral drugs against DENV infection. The lack of a suitable animal model has hampered the evaluation of novel antiviral candidates for DENV ...
[摘要] 登革热是由4种相关登革热病毒血清型（DENV1-4）的任一种感染引起的全球公共卫生威胁。临床表现的范围从自限性发热疾病，称为登革热（DF），到危及生命的严重疾病，如登革热出血热（DHF）或登革热休克综合征（DSS）。大多数DHF/DSS病例通过描述为抗体依赖性增强感染（ADE）的现象与继发性异型感染相关。估计每年有4亿人感染和数十万例严重登革热病例。然而，目前，还没有批准的抗DENV感染的抗病毒药物。缺乏合适的动物模型阻碍了DENV感染的新抗病毒候选物的评价。由于DENV在免疫活性小鼠中不良地建立感染，已将AG129小鼠（缺乏I型和II型IFN [干扰素]受体）和小鼠适应的DENV2株应用于能够繁殖人类感染的几种主要病理的登革动物模型。最近，我们开发了具有临床分离株DENV1和DENV2的新的小鼠模型，其将用于药物测试和登革热发病机理研究（Watanabe等人，2016）。在这里我们描述建立临床分离株的登革热小鼠模型的细节;从体外材料制备到体内病毒感染。值得注意的是，由于DENV在小鼠中的感染性在病毒株之间不同，不是所有临床分离株都可以诱导严重的登革热。
关键字：登革热病毒，致命的小鼠模型，临床病毒，病毒感染的抗体依赖性增强，药物测试
[背景] 为了克服DENV在啮齿动物细胞中不能很好复制的缺点，多年来已经进行了许多努力来开发模拟人类登革热感染的小动物模型。近交小鼠模型系统允许实验可变性最小化，并且遗传工程小鼠模型能够再现动物中登革热临床症状的一些方面。过去的研究显示，用DENV2临床分离物感染的AG129小鼠（缺乏I型和II型IFN受体）感染瘫痪的迹象，这是中枢神经系统受累的病症，在人类病例中是罕见的（Shresta等人。，2004）。或者，产生可在AG129小鼠中诱导人类DHF/DSS样疾病的小鼠适应的DENV2毒株，并已用于登革热研究（Shresta等人，2006; ...
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