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Micropippette tip, 10 µl

Micropippette tip, 10 µl

Company: Mettler-Toledo International
Catalog#: 17004280
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Other protocol()

Transformation of Thermus Species by Natural Competence
Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract]  Many Thermus species harbour genomes scourged with horizontally transferred signatures. Thermus thermophilus (Tth) has been characterized as naturally competent. The transformation protocol described here is based on the maximum DNA uptake rates registered at mid-exponential phase (OD600 0.3-0.4). Here we describe the stepwise protocol followed for transformation of both plasmids and linearized genomic DNA, of which the latter can be employed as an alternative method to electroporation to introduce mutations or to generate gene deletions in Thermus isolates, for instance. [摘要]  许多 物种港口基因组受到水平转移的签名的影响。 嗜热栖热菌 ( Tth )已被表征为天生胜任。本文所述的转化方案是基于在中指数期(OD <600> 0.3-0.4)处登记的最大DNA摄取速率。在这里我们描述了转化质粒和线性化基因组DNA的逐步方案,其中后者可以用作电穿孔以引入突变或在Thermus 分离物中产生基因缺失的替代方法,实例。 [背景] 嗜热栖热菌( Tth )是一种极端的嗜热菌种,由于其古老的系统发生起源,其蛋白质和大分子复合物的结晶的相对容易,以及其几种分离物的实验室生长条件下的快速生长和良好产量。在最常用的分离株中,菌株T。嗜热链球菌HB27和HB8构成最常用的模型,因为它们可以通过天然能力转化的高比率。任何来源和拓扑的DNA可以通过以约40kb/s /细胞的速率培养这些分离物的细胞容易地被吸收(Schwarzenlander和Averhoff,2006),显示约10个转化体/活细胞。为此,涉及在两种菌株的染色体(Averhoff,2009)中的五个基因座中编码的至少16种蛋白质的极性定位的天然竞争性装置(Gold等人,2015)基本上表达在组成型虽然转化效率在指数期较高。已经通过定向进化作为基因标记开发了编码热稳定变体的抗生素抗性基因的变体,以这种方式,可以在具有卡那霉素(Lasa等人,1992),潮霉素B ...

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