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Date:
2016-11-05
[Abstract] Here we report the adaptation of the CLARITY technique to plant tissues with addition of enzymatic degradation to improve optical clearing and facilitate antibody probe penetration. Plant-Enzyme-Assisted (PEA)-CLARITY, has allowed deep optical visualisation of stains, expressed fluorescent proteins and IgG-antibodies in tobacco and Arabidopsis leaves. Enzyme treatment enabled penetration of antibodies into whole tissues without the need for any sectioning of the material. Therefore, this protocol facilitates protein localisation of intact tissue in 3D whilst retaining cellular structure.
[摘要] 在这里我们报告CLARITY技术适应植物组织与添加的酶降解，以提高光学清除和促进抗体探针穿透。植物 - 酶辅助（PEA）-CLARITY，允许在烟草和拟南芥叶中的污渍，表达的荧光蛋白和IgG抗体的深度光学可视化。酶处理使得抗体能够穿透进入整个组织，而不需要材料的任何切片。因此，该方案促进3D中完整组织的蛋白定位，同时保留细胞结构。
[背景] 使用组织学染色等技术固定和包埋植物组织进行分子探查，免疫组织化学或原位杂交几十年来一直是细胞生物学研究的基础。将这些技术应用于3D组织分析严重受限于需要切片组织，对每个部分成像，然后将图像重新组装成感兴趣结构的3D表示。这里我们提出从二维平面到三维的基本转变，同时保留感兴趣的分子结构，而不需要切片植物组织。固定和"清除"技术，如SeeDB，ScaleA2，3DISCO，CLARITY和其最近的变种PACT的最新进展使小鼠和大鼠模型中完整成像的整个胚胎，大脑和其他器官。新的CLARITY系统固定并结合丙烯酰胺网状结构内的组织。蛋白质和核酸通过甲醛与丙烯酰胺网状物共价连接，然后使用洗涤剂（SDS）除去动物细胞膜的光学干扰脂质结构。这使得这样的组织是光学透明的，并且适合于使用共聚焦显微镜的高达〜5mm的深度成像
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