| Vascular Smooth Muscle Cell Isolation and Culture from Mouse Aorta
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Vascular smooth muscle cells (SMC) in the ascending thoracic aorta arise from neural crest cells, whereas SMCs in the descending aorta are derived from the presomitic mesoderm. SMCs play important roles in cardiovascular development and aortic aneurysm formation. This protocol describes the detailed process for explanting ascending and descending SMCs from mouse aortic tissue. Conditions for maintenance and subculture of isolated SMCs and characterization of the vascular SMC phenotype are also described.
[摘要] 在升主动脉中的血管平滑肌细胞（SMC）产生于神经嵴细胞，而降主动脉中的SMC来源于presomitic中胚层。 SMC在心血管发育和主动脉瘤形成中起重要作用。该协议描述了从小鼠主动脉组织移出升序和降序的SMC的详细过程。还描述了分离的SMC的维持和传代培养的条件和血管SMC表型的表征。
关键字：组织培养，平滑肌细胞，细胞生物学
[背景] 血管平滑肌细胞肌肉内侧动脉层。较大的弹性动脉，例如主动脉，具有由夹在弹性蛋白纤维之间的对齐的平滑肌细胞组成的多个同心薄片。存在于弹性动脉的内侧层中的弹性蛋白和胶原允许它分布由心脏在整个血管壁产生的力（Wagenseil和Mecham，2009）。相比之下，较小的肌肉动脉仅具有限制平滑肌层的内部和外部弹性层。这些动脉位于动脉树的下游，因此受到血流的作用力较小。
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| Isolation of Highly Pure Primary Mouse Alveolar Epithelial Type II Cells by Flow Cytometric Cell Sorting
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] In this protocol, we describe the method for isolating highly pure primary alveolar epithelial type II (ATII) cells from lungs of naïve mice. The method combines negative selection for a variety of lineage markers along with positive selection for EpCAM, a pan-epithelial cell marker. This method yields 2-3 x 106 ATII cells per mouse lung. The cell preps are highly pure and viable and can be used for genomic or proteomic analyses or cultured ex vivo to understand their roles in various biological processes.
[摘要] 在这个协议，我们描述从初始小鼠的肺分离高纯度原发性肺泡上皮细胞类型（ATII）细胞的方法。该方法结合对多种谱系标志物的阴性选择以及对于Ep上皮细胞标记物EpCAM的阳性选择。该方法每小鼠肺产生2-3×10 6个ATII细胞。细胞制品是高度纯的和可行的，并且可以用于基因组或蛋白质组分析或培养离体以了解他们在各种生物过程中的作用。
[背景] 肺的内表面由上皮细胞排列，上皮细胞的类型在形态上和功能上随着肺内的位置而变化。 ATII细胞是两种类型的上皮细胞中的一种，其排列在肺泡壁上并且已经被描述为在表面活性剂合成和分泌中起关键作用。它们也是肺内第一道防线的一部分，并且涉及在肺部感染或过敏期间引发和调节免疫应答。它们还被认为在远端肺中充当具有增殖能力和损伤后修复上皮的能力的祖细胞。 ATII分离的可用方法不产生超过80-85％纯度的细胞制品，使得它们不适合于mRNA和蛋白质表达的可靠分析。本文所述的方法是对现有方法的改进，并产生具有最高纯度的小鼠原代ATII细胞制备物，因此可以可靠地用于表达分析。对于该方法的进一步讨论，我们将读者指向该协议起源的原始出版物（Sinha等人，2016）。
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| Isolation of Splenic Dendritic Cells Using Fluorescence-activated Cell Sorting
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Author:
Date:
2015-03-05
[Abstract] The spleen is a vastly vasculated organ and consists of a complex organized network of innate and adaptive immune cells. This permits the specialized functions of the spleen such as antibacterial and antifungal immunity and iron metabolism among others (Mebius and Kraal, 2005). Different dendritic cell (DC) subsets reside in the spleen and can be defined by the expression of unique surface markers. These DC subsets are recognized to perform non-redundant functions in the immune system (Merad et al., 2013). In our recent study, we found that Inositol Requiring Enzyme (IRE)-1 is specifically activated in splenic CD8a+ DCs. Furthermore, loss of X-box binding protein (XBP)-1 – the transcription factor regulated by IRE-1 – resulted in defective cross-presentation of dead ...
[摘要] 脾脏是一个巨大的血管的器官，由一个复杂的有组织的网络的先天和适应性免疫细胞组成。 这允许脾的特殊功能，例如抗菌和抗真菌免疫和铁代谢等（Mebius和Kraal，2005）。 不同的树突状细胞（DC）子集驻留在脾脏中，并且可以通过表达独特的表面标志物来定义。 认识到这些DC亚类在免疫系统中执行非冗余功能（Merad等人，2013）。 在我们最近的研究中，我们发现肌醇需求酶（IRE）-1在脾CD8a + DC中特异性激活。 此外，X-box结合蛋白（XBP）-1（由IRE-1调节的转录因子）的缺失导致脾CD8a + DC（Osorio em> et al。，2014）。 该协议允许分离用于实验使用的特异性DC亚群ex-vivo 。
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