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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Genome instability can lead to cell death, senescence and cancerous transformation. Specific repair pathways have evolved to prevent accumulation of DNA lesions. Studying these highly dynamic and specific repair pathways requires precise spatial and temporal resolution, which can be achieved through a combination of laser microirradiaiton and live cell microscopy. DNA lesions are introduced at pre-determined sub-nuclear sites and repair can be analyzed in real time in living cells when using fluorescently tagged repair proteins (Mortusewicz et al., 2008). Alternatively, laser microirradiation can be combined with immunofluorescence analysis to study recruitment of endogenous proteins to laser-induced DNA damage tracks that can be visualized by positive controls like, e.g., ...
[摘要] 基因组不稳定性可导致细胞死亡，衰老和癌性转化。特异性修复途径已经进化以防止DNA损伤的累积。研究这些高度动态和特定的修复途径需要精确的空间和时间分辨率，这可以通过激光微激光和活细胞显微镜的组合实现。当使用荧光标记的修复蛋白时，在预定的亚核位点引入DNA损伤并且可以在活细胞中实时分析修复（Mortusewicz等人，2008）。或者，激光微辐照可与免疫荧光分析结合以研究内源蛋白质对激光诱导的DNA损伤轨迹的募集，其可通过阳性对照例如标记DNA断裂位点的γH2AX显现。
关键字：微辐射，活细胞成像，DNA损伤，DNA修复，DNA损伤，DNA损伤反应，免疫荧光，显微镜等
/strong>哺乳动物细胞的基因组完整性不断受到通过外部和内部来源引入的DNA损伤的挑战。最常见的DNA损伤是氧化碱基，双链断裂，单链断裂，链间和链内交联和UV加合物。已经发展了各种DNA损伤信号传导和修复途径以处理这些损伤。为了使DNA修复快速，精确和有效，涉及感测，信号传导和修复特定DNA损伤的许多蛋白质必须在空间和时间上协调。此外，DNA被组织成更高级的染色质结构，因此对于DNA损伤，DNA修复酶是可及的，染色质必须重塑。激光微照射与高级活细胞显微镜相结合允许在活细胞的上下文中研究这些高度动态的过程（Mortusewicz等人，2008）。这里描述的协议使用405 ...
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