| RNA-dependent RNA Polymerase Assay for Hepatitis E Virus
|
|
Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) is essential for the replication of viral RNA for RNA viruses. It synthesizes the complementary strand of viral genomic RNA, which is used subsequently as a template to generate more copies of viral genome. This assay measures activity of the hepatitis E virus (HEV) RdRp. In contrast to protocols available to assay the RdRp activity of many other viruses, this assay utilizes DIG-11-UTP as a nonradioactive alternative to 32P-UTP, thereby increasing the convenience of performing the assay.
[摘要] RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）对RNA病毒的病毒RNA的复制至关重要。 它合成病毒基因组RNA的互补链，其随后用作模板以产生更多的病毒基因组拷贝。 该测定法测定戊型肝炎病毒（HEV）RdRp的活性。 与可用于测定许多其他病毒的RdRp活性的方案相比，该测定法使用DIG-11-UTP作为32P-UTP的非放射性替代物，从而增加了进行测定的便利性。
没有测定可测量HEV RdRp的活性。 已经使用放射性标记的核苷酸（Behrens等人，1996）在少数其他病毒如丙型肝炎病毒中测量了RdRp活性。 我们已经调整了Behrens等人所描述的协议。 （1996），并将其修饰为建立非放射性测定方案，其依赖于将DIG-11-UTP掺入反义RNA链中作为HEV RdRp的活性的量度。 该测定使用体外合成的病毒RNA片段作为模板，以使用基于化学发光的策略来测量从人肝癌细胞纯化的HEV RdRp蛋白的活性。
|
|
|
| Detection of Reactive Oxygen Species in Oryza sativa L. (Rice)
|
|
Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] Superoxide ions (O2-) and hydrogen peroxide (H2O2) are the reactive oxygen species (ROS) that play a significant role in regulation of many plant processes. The level of O2- ions is determined qualitatively using nitrobluetetrazolium (NBT) assay while the H2O2 is qualitatively estimated using 3,3-diaminobenzidine (DAB) and 2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2DCFDA) assay. Further the aqueous content of H2O2 is estimated quantitatively using ferrous oxidation-xylenol orange (FOX) assay.
[摘要] 超氧化物离子（O 2 - ）和过氧化氢（H 2 O 2 O 2）是起重要作用的活性氧（ROS）在许多植物过程的调节。使用硝基四氮唑（NBT）测定定性地测定O 2 - 离子的水平，同时使用3,3 - 二氨基联苯胺（DAB）和2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯（H 2 N 2 DCFDA）测定。此外，使用亚铁氧化 - 二甲苯酚橙（FOX）测定定量地估计H 2 O 2 O 2的含水量。
背景 超氧化物离子和过氧化氢是在许多情况下起主要作用的活性氧分子涉及植物生长发育的过程包括非生物胁迫耐受性。为了更好地了解ROS对这些过程的调节，对不同类型ROS的定性和定量估计具有重要意义。通过由NADPH氧化酶系统介导的电子从NADPH转移到氧（O 2），产生O 2。使用NBT测定法在水稻幼苗中估计这些离子，其基于通过O将黄色NBT还原成深蓝色不溶性甲the的原理（Kaur等人，2016）。
＆nbsp; H 2是另一种作为调节不同植物过程的重要信号分子的活性氧分子。在使用DAB和H 2 DCFDA测定的水稻幼苗中定性地估计H 2 O 2 O 2的含量（Kaur等人，2016）。 DAB测定是基于DAB与H 2 O 2 O 2的反应形成深棕色聚合产物的原理，而H 2 N 2 ...
|
|
|