| Extraction and Analysis of Pan-metabolome Polar Metabolites by Ultra Performance Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry (UPLC-MS/MS)
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] Modern triple quadrupole mass spectrometers provide the ability to detect and quantify a large number of metabolites using tandem mass spectrometry (MS/MS). Liquid chromatography (LC) is advantageous, as it does not require derivatization procedures and a large diversity in physiochemical characteristics of analytes can be accommodated through a variety of column chemistries. Recently, the comprehensive optimization of LC-MS metabolomics using design of experiments (COLMeD) approach has been described and used by our group to develop robust LC-MS workflows (Rhoades and Weljie, 2016). The optimized LC-MS/MS method described here has been utilized extensively for metabolomics analysis of polar metabolites. Typically, tissue or biofluid samples are extracted using a modified Bligh-Dyer ...
[摘要] 现代三重四极杆质谱仪提供检测和定量大量使用串联质谱（MS / MS）的代谢物的能力。液相色谱（LC）是有利的，因为它不需要大量的生理化学特性。近日，采用的实验（Colmed）的方式设计LC-MS代谢组的全面优化已经被描述和使用我们集团发展稳健的LC-MS工作流程（罗兹和Weljie，2016）。优化的LC-MS / MS方法已被广泛应用于极性代谢物的代谢组学分析。典型地，组织或生物流体样品使用经修饰的Bligh-Dyer的协议萃取（Bligh和Dyer的，1959; Tambellini 等人，2013年）。在此描述的方案使用靶向极性代谢物从通过超高效液相色谱 - 串联质谱法（UPLC-MS / MS）的组织和生物流体多反应监测（MRM）描述的工作流程。此工作流已被广泛用于chronometabolic分析（Krishnaiah 等人，第二千〇十七）中，用推广到其他类型的分析，以及应用程序（森古普塔等人 2017。 Sivanand等人，2017）。
【背景】质谱（MS）和核磁共振（NMR）（Liu和Locasale，2017）。虽然核磁共振和质谱是代谢组学的重要工具，但质谱可以更灵敏地分析样品（Liu and Locasale，2017）。在质谱法中，有多种方法可用，但是需要快速方法来描述全球代谢组学（Lv et ...
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| Ionization Properties of Phospholipids Determined by Zeta Potential Measurements
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Biological membranes are vital for diverse cellular functions such as maintaining cell and organelle structure, selective permeability, active transport, and signaling. The surface charge of the membrane bilayer plays a critical role in these myriad processes. For most biomembranes, the surface charge of anionic phospholipids contributes to the negative surface charge density within the interfacial region of the bilayer. To quantify surface charge, it is essential to understand the proton dissociation behavior of the titratable headgroups within such lipids. We describe a protocol that uses model membranes for electrokinetic zeta potential measurements coupled with data analysis using Gouy-Chapman-Stern formalism to determine the pKa value of the component lipids. A ...
[摘要] 生物膜对于多种细胞功能如维持细胞和细胞器结构，选择性渗透性，主动转运和信号传导至关重要。膜双层的表面电荷在这些无数过程中起关键作用。对于大多数生物膜，阴离子磷脂的表面电荷有助于在双层的界面区域内的负表面电荷密度。为了量化表面电荷，必须理解可滴定头基在这种脂质内的质子解离行为。我们描述了使用模型膜用于电动ζ电位测量以及使用Gouy-Chapman-Stern形式的数据分析以确定组分脂质的p a 值的方案。提供了由单阴离子脂质磷脂酰甘油组成的均匀双层的详细实施例。这种方法可以适用于测量具有异质脂质组合的双层，以及用于在头部组中具有多个可滴定位点的脂质（例如，心磷脂）。
[背景] 磷脂是生物膜的中心结构单元（图1）。作为两亲性分子，每个包含由酰基链组成的疏水区和由极性头基组成的亲水区（图1A）。一些磷脂头基是两性离子的，在生理pH下含有带正电和带负电的官能团（图1B），而其它磷脂头基是酸性的，带有整体形式的负电荷（图1C）。生物膜内的脂质作为层状组件稳定存在，形成双层，其中两个叶的酰基链相互作用形成疏水核和由极性头基组成的两个界面区域（图1D）。大多数天然存在的生物膜含有一定百分比的酸性磷脂;因此，它们的脂质组成赋予界面区域净负电荷（Gennis，1989; ...
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