A Reliable Assay to Evaluate the Virulence of Aspergillus nidulans Using the Alternative Animal Model Galleria mellonella (Lepidoptera)
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] The greater wax moth Galleria mellonella has emerged as an effective heterologous host to study fungal pathogenesis and the efficacy of promising antifungal drugs (Mylonakis et al., 2005; Li et al., 2013). Here, a methodology describing the Aspergillus nidulans infection in G. mellonella larvae, along with insect survival analysis, is reported. This protocol allowed the distinction between virulent A. nidulans strains (such as TNO2A3), which induced high larval mortality rates, to those in which gene deletion was accompanied by reduced pathogenicity such as ∆gcsA and ∆sdeA (Fernandes et al., 2016).
[摘要] 作为一种有效的异源宿主,越来越多的蜡蛾已经出现了一种有效的异源宿主,用于研究真菌发病机制和有希望的抗真菌药物的功效(Mylonakis等人,2005; Li& et al。2013)。这里,描述了一种描述构巢曲霉感染的方法。 mellonella 幼虫与昆虫存活分析一起报道。该协议允许区分有毒的 A。造成高幼虫死亡率的构巢组织菌株(如TNO2A3)与基因缺失伴随着致病性降低的病例如ΔGCA和ΔSAA(Fernandes 等人,2016)。
背景 -G。 mellonella 是一种廉价的模型,易于处理,其先天免疫反应与哺乳动物免疫系统分享功能相似性。此外,感染真菌突变菌株的幼虫和小鼠表现出相似的存活率(Brennan等人,2002)。因此,幼虫构成了一种方便的动物宿主,用于在真菌发病机理分析中代替脊椎动物的使用。尽管昆虫模型具有所有优点,但只有少数报告显示了G中曲霉菌感染的作用。蜡螟。该协议描述了一种有效的方法,用于分析G中的构巢曲霉发病机制。 mellonella 幼虫。
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Cell-to-cell DNA Transfer among Thermus Species
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Date:
2016-11-20
[Abstract] The ability to transfer DNA via direct cell-to-cell contact-dependent process similar to conjugation has been described in Thermus thermophilus (Tth). Here, we detail the mating experiment protocol involving the lateral transfer of thermostable antibiotic resistance markers (i.e., kanamycin: KmR; hygromycin: HygR) between Thermus cells, enabling the selection and quantification of the transfer frequencies. Briefly, liquid cultures of both mates are mixed and laid onto a nitrocellulose filter on a TB plate. After incubation at 60 °C, filters are resuspended upon selective plating. The contribution of DNA uptake by transformation is abolished by the addition of DNase I to the mix. This protocol can be used for the transfer of large DNA ...
[摘要] 通过与共轭相似的直接细胞间接触依赖性过程转移DNA的能力已在Thermus thermophilus(Tth)中描述。在这里,我们详细描述了包括热稳定抗生素抗性标记(即卡那霉素:Km),潮霉素:Hyg R 的横向转移的交配实验方案>)在 细胞之间,使得能够选择和量化转移频率。简言之,将两种配合物的液体培养物混合并铺在TB板上的硝酸纤维素滤膜上。在60℃温育后,在选择性平板培养基上重悬浮过滤器。通过向混合物中加入DNA酶I消除通过转化的DNA摄取的贡献。该方案可用于将大DNA片段(> 10kb)转移到Thermus 物种。 [背景] 是大多数细菌水平基因转移的主要机制,是一种高度专业化的过程,通过其DNA在直接接触的两个细胞之间转移(Lederberg和Tatum,1946)。经典缀合涉及DNA分子(通常是质粒编码的)从供体到受体细胞的单向转移,其仍然是被动的。然而,已经描述了用于多种细菌的替代模型。在实验室中,缀合实验对于标志物交换诱变是有效的。在其它遗传转移方法中,缀合在细菌包膜的最小破坏和转移大DNA片段(包括大的染色体区域(> 10kb))的可行性方面是有利的。 在T之间的共轭样过程。嗜热细菌在十年前被报道,其中染色体标记在重组HFR - ...
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Halo Assay for Toxic Peptides and Other Compounds in Microorganisms
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Date:
2016-11-20
[Abstract] We describe an assay for determination of toxicity in S. cerevisiae involving spotting of a toxic peptide on a lawn of yeast cells. This assay may be generalized to determine toxicity of a variety of compounds by substituting a putative toxic compound in place of the peptide. The general protocol may also be used to determine toxicity of any small compound toward another microorganism by replacing S. cerevisiae with the target microbe and modifying growth conditions accordingly.
[摘要] 我们描述了用于测定S中的毒性的测定法。酿酒酵母包括在酵母细胞的菌苔上发现毒性肽。该测定法可以概括为通过用推定的毒性化合物代替肽来测定多种化合物的毒性。一般方案还可以用于通过替换S来确定任何小的化合物对另一种微生物的毒性。酿酒酵母与目标微生物并相应地改变生长条件。 [背景] 二肽/三肽是所有生物体氮,碳和氨基酸的主要来源之一。含有毒性氨基酸残基的合成肽提供了测定酿酒酵母中肽转运和/或利用的实验方法。通过细胞内肽酶或蛋白酶水解内化肽释放毒性残留物,导致在培养皿中铺板的细胞培养板上生长停滞的容易检测的区域(晕轮)。例如,在细胞内水解时,毒性肽Ala-Eth释放乙硫氨酸(Eth),甲硫氨酸拮抗剂干扰氨基酸掺入蛋白质中以及DNA和其它甲基化途径的正常甲基化,从而导致细胞死亡。当点样到酵母细胞的草坪上时,转运的二肽Ala-Eth将抑制生长,并且在含有Eth的有毒肽被点样的区域周围的细胞的细胞壁中形成清晰的"晕"(图1A)。本文描述的用于测定肽中毒性的测定。 (1)可以通过简单地使用推定的有毒化合物代替含有毒性氨基酸的肽来修饰以确定任何底物的毒性,或者(2)其可以被修饰以通过替换S来确定底物对任何微生物的毒性。酿酒酵母在用靶生物的测定中。它是一种简单,廉价和相对快速的方法,用于确定针对特定生物体和所测定的毒性部分修改的底物毒性。
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