| Isolation of Genomic DNA from Chlamydomonas reinhardtii
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] Chlamydomonas reinhardtii is a soil-dwelling eukaryotic green alga that is widely used as a laboratory model organism for research on photosynthesis, ciliary biology, lipid metabolism and many other aspects of cell biology and physiology. With sequenced nuclear, chloroplast and mitochondrial genomes, Chlamydomonas is also an excellent organism for genetics and genomics research. This protocol describes the isolation of genomic DNA from Chlamydomonas using a standard phenol:chloroform extraction method followed by ethanol precipitation. The protocol requires minimal lab materials, takes approximately 4 h to complete, and can also be used for isolation of genomic DNA from other eukaryotic green algae.
[摘要] 莱茵衣藻是一种土壤居住的真核绿藻，广泛用作实验室模型生物，用于光合作用，睫状生物学，脂质代谢以及细胞生物学和生理学的许多其他方面的研究。 随着核，叶绿体和线粒体基因组的测序，衣藻也是遗传学和基因组学研究的优秀生物。 该协议描述了使用标准酚：氯仿提取方法然后乙醇沉淀从衣藻（Chlamydomonas）中分离基因组DNA。 该协议需要最少的实验室材料，大约需要4小时才能完成，也可用于从其他真核绿藻中分离基因组DNA。
【背景】分离核酸是克隆和测序遗传物质的关键第一步，为从基因表达到基因进化等各种分子生物学研究提供了基础。存在许多用于从藻类中分离DNA的方案（Weeks等人，1986; Fawley和Fawley，2004; HwangBo等人，2010）。通常，通过离心沉淀细胞并在含有去污剂如SDS的缓冲液中裂解以溶解膜。随后在苯酚：氯仿中提取至少一次，并在氯仿中提取至少一次。在一些情况下，进行RNA酶处理步骤以降解RNA。然后通过加入乙醇或异丙醇沉淀DNA，并在冰上或在冰箱中孵育。沉淀并洗涤沉淀的DNA后，通常将其重悬于水或缓冲液（例如Tris-EDTA）中，并在260nm处通过分光光度法定量。
本文所述的方案利用两次苯酚/氯仿/异戊醇萃取和两次氯仿/异戊醇萃取，其间具有RNase处理步骤。在有机溶剂中加入异戊醇可防止起泡并稳定含有高浓度凝固蛋白的界面。重要的是，该协议产生高质量的基因组DNA，适用于下游应用，如克隆和测序。 ...
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| Construction of FWPV Chimaeric MVA
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Author:
Date:
2015-01-05
[Abstract] Construction of chimaeric MVA is a useful tool with which to study gene function of related viruses. The protocol given here describes MVA chimaeras containing genes from Fowlpox virus (FWPV), although this can be applied to DNA derived from other organisms. There are a number of steps required to make the chimaeric MVA: 1) Purification of viral particles; 2) Extraction of DNA from purified viral particles; 3) Assembly of linear recombination templates; 4) Transfection of linear recombination templates; 5) Selection of chimaeric MVA.
Note: This procedure uses live virus, and should be conducted using Good Microbiological Practice, in accordance with international and national biocontainment requirements. This procedure also involves Genetic Modification of microorganisms, and ...
[摘要] 嵌合MVA的构建是研究相关病毒的基因功能的有用工具。 本文给出的方案描述了含有来自鸡痘病毒（FWPV）的基因的MVA嵌合体，尽管这可以应用于来自其他生物体的DNA。 制备嵌合MVA需要许多步骤：1）病毒颗粒的纯化; 2）从纯化的病毒颗粒中提取DNA; 3）装配线性重组模板; 4）线性重组模板的转染; 5）嵌合MVA的选择。
注意：此程序使用活病毒，并应根据国际和国家生物承诺要求使用良好微生物实践进行。 该程序还涉及微生物的遗传修饰，并且在开始前应获得适当的安全批准。
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