| Protein Synthesis Rate Assessment by Fluorescence Recovery after Photobleaching (FRAP)
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Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Currently available biochemical methods cannot be applied to monitor protein synthesis in specific cells or tissues, in live specimens. Here, we describe a non-invasive method for monitoring protein synthesis in single cells or tissues with intrinsically different translation rates, in live Caenorhabditis elegans animals.
[摘要] 目前可用的生物化学方法不能用于监测活体标本中特定细胞或组织中的蛋白质合成。在这里，我们描述了在活的秀丽隐杆线虫动物中监测具有本质上不同的翻译速率的单个细胞或组织中的蛋白质合成的非侵入性方法。
背景 蛋白质合成的适当调节对于细胞稳态和生长至关重要。蛋白质合成的放松规律已经涉及到诸如癌症和衰老衰退的病理学（Bjornsti和Houghton，2004; Syntichaki等人，2007）。目前可用的用于测量一般蛋白质合成速率的生物化学方法包括代谢标记和多糖成像（Martin，1998; Rennie等人，1994）。这些方法的适用性受限于标签在整个动物或感兴趣组织中的摄取不足和不受控制或不平等的分布。此外，这些方法缺乏特异性，由于大部分样品的固有翻译速率的变异性，可能会掩盖特定细胞或感兴趣的组织的显着变化。在本协议中，我们描述了一种基于光漂白（FRAP）后的荧光恢复来监测线虫秀丽隐杆线虫的蛋白质合成速率的方法。实验方法是基于转基因动物感兴趣的细胞和组织中荧光蛋白的表达。然后通过用强大的光源照射细胞，组织或整个动物来对荧光进行光漂白。然后在感兴趣的细胞或组织中监测指示新蛋白质合成的荧光的恢复。
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| Cytohistological Analyses of Mega-sporogenesis and Gametogenesis in Ovules of Limonium spp.
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Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract] Limonium spp. are known to have sexual and apomixis (asexual reproduction through seeds) reproductive modes. Here, we present dissection protocol developed for ovules of Limonium spp. using differential interference contrast (DIC) microscopy. This protocol permits better handling of ovules and offers certain advantages over earlier techniques particularly in larger ovules. This method also enables observation of meiosis and embryo sac development in intact ovules, and the ready detection of events distinguishing sexual and apomictic development.
[摘要] Limonium 已知有性和无融合生殖（通过种子的无性繁殖）繁殖模式。在这里，我们提出解剖协议为胚珠的发芽。使用微分干涉对比（DIC）显微镜。该协议允许更好地处理胚珠，并提供优于早期技术，特别是在较大胚珠的某些优势。这种方法还能够观察到完整胚珠中的减数分裂和胚囊发育，以及容易检测到区别性和无序性发育的事件。
[背景] 发生在胚珠发育期间，有必要细胞学检查胚珠。这项研究可以涉及显微镜观察石蜡或树脂包埋，切片材料或清除的器官。在D'Amato（1940; 1949）的先驱作品中公开了对性和无融合生殖物种中胚珠和胚囊发育的第一次细胞学研究。在这些作品中，花使用Karpechenko的方法固定，包埋在石蜡中，切片并用Heidenhain的铁苏木精染色，其染色质和染色体在细胞核中染色。使用这些方法的花芽切片可导致由于单个细胞的部分破坏结构完整性而具有差质量的制备物。更容易的选择是清除福尔马林：乙酸：乙醇固定的器官并用纯的Mayer's hemalum染色（Wallis，1957; Stelly等人，1984）。这种技术需要少得多的时间和劳动，特别是对于通常在卵巢中形成小胚珠的物种，这是 Limonium ...
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