| Artificial Inoculation of Epichloë festucae into Lolium perenne, and Visualisation of Endophytic and Epiphyllous Fungal Growth
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Natural hosts for the fungal endophyte Epichloë festucae include Festuca rubra (fine fescue) and Festuca trachyphylla (hard fescue). Some strains also form stable associations with Lolium perenne (perennial ryegrass). L. perenne is a suitable host to study fungal endophyte–grass interactions, such as endophytic fungal growth within the plant and epiphyllous growth on the plant surface. Here we provide a detailed protocol based on work by, for artificial inoculation of E. festucae into L. perenne, and newly developed staining and visualization techniques for observing endophytic and epiphyllous hyphae and the expressorium, an appressorium-like structure used by the fungus to exit the plant. The staining method uses a combination of ...
[摘要] 真菌内生菌Epichloëfestucae的天然宿主包括 Festuca rubra （细羊茅）和 Festuca trachyphylla （硬羊茅）。一些菌株也与黑麦草（多年生黑麦草）形成稳定的关联。 升。 perenne 是研究真菌内生菌 - 草相互作用的合适宿主，例如植物内生真菌生长和植物表面的叶生生长。在这里，我们提供了一个基于工作的详细协议，用于 E的人工接种。 festucae 进入 L. perenne ，以及新开发的染色和可视化技术，用于观察内生和附生的菌丝和表达菌，这是一种类似真菌的结构，用于离开植物。染色方法使用葡聚糖结合苯胺蓝二铵盐（AB）和几丁质结合小麦胚凝集素缀合的Alexa Fluor ® 488-（WGA-AF488）的组合。该协议将是研究Epichloë -grass相互作用的有用工具，特别是不同Epichloë - 草关联，各种内生菌 - 宿主发育阶段的比较，以及分析突变Epichloë菌株。
【背景】Latch和Christensen（1985）开发了一种用Epichloë内生菌人工感染草的方案。这项工作一直是广泛的 E的基础。 festucae Fl1- L. perenne 共生研究（Scott et al。，2012年综述）。在我们最近的工作中，我们描述了一种新发现的真菌结构，即能够实现 E的表达式。 ...
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| Generation of Caenorhabditis elegans Transgenic Animals by DNA Microinjection
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Author:
Date:
2017-10-05
[Abstract] Microinjection is the most frequently used tool for genetic transformation of the nematode Caenorhabditis elegans, facilitating the transgenic expression of genes, genome editing by the clustered regularly interspersed short palindromic repeats (CRISPR)-Cas9 system, or transcription of dsRNA for RNA intereference (RNAi). Exogenous DNA is delivered into the developing oocytes in the germline of adult hermaphrodites, which then generate transgenic animals among their offspring. In this protocol, we describe the microinjection procedure and the subsequent selection of transgenic progeny.
[摘要] 显微注射是线虫秀丽隐杆线虫遗传转化中最常用的工具，促进基因的转基因表达，通过聚集的定期散布的短回文重复序列（CRISPR）-Cas9系统的基因组编辑或转录 dsRNA用于RNA干扰（RNAi）。 外源DNA被递送到成年雌雄同株的种系中的发育中的卵母细胞中，然后在它们的后代中产生转基因动物。 在该方案中，我们描述了显微注射程序和随后的转基因后代选择。
【背景】在C.通过显微注射的DNA转化通常用于产生过表达或异位表达可以与标签（例如，绿色荧光蛋白[GFP]）融合的基因的转基因动物，允许突变体的表型拯救和/或蛋白质的定位和功能的分析（Carter等人，1990; Chalfie等人，1994; Mello和Fire，1995）。聚集的定期散布的短回文重复（CRISPR）-Cas9系统的出现需要显微注射以通过引入点突变或插入/缺失突变来实现高度特异性的基因组编辑（概述于Dickinson和Goldstein，2016）。此外，该技术被应用于dsRNA的可诱导和/或组织特异性转录以便于遗传性RNA干扰（RNAi）（Tavernarakis等人，2000） ...
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| P-body and Stress Granule Quantification in Caenorhabditis elegans
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Date:
2017-01-20
[Abstract] Eukaryotic cells contain various types of cytoplasmic, non-membrane bound ribonucleoprotein (RNP) granules that consist of non-translating mRNAs and a versatile set of associated proteins. One prominent type of RNP granules is Processing bodies (P bodies), which majorly harbors translationally inactive mRNAs and an array of proteins mediating mRNA degradation, translational repression and cellular mRNA transport (Sheth and Parker, 2003). Another type of RNP granules, the stress granules (SGs), majorly contain mRNAs associated with translation initiation factors and are formed upon stress-induced translational stalling (Kedersha et al., 2000 and 1999). Multiple evidence obtained from studies in unicellular organisms supports a model in which P bodies and SGs physically interact ...
[摘要] 真核细胞含有各种类型的细胞质，非膜结合的核糖核蛋白（RNP）颗粒，其由非翻译mRNA和多种相关蛋白组成。一种突出类型的RNP颗粒是加工体（P体），其主要包含翻译失活的mRNA和介导mRNA降解，翻译抑制和细胞mRNA运输的蛋白质阵列（Sheth和Parker，2003）。另一种类型的RNP颗粒，应激颗粒（SGs）主要含有与翻译起始因子相关的mRNA并且在应激诱导的翻译失速（Kedersha等人，2000和1999）中形成。从单细胞生物学研究中获得的多个证据支持了一种模型，其中P体和SG在细胞应激期间物理相互作用以将mRNA转运，转移，临时储存或折返到翻译中（Anderson和Kedersha，2008; Decker和Parker，2012）。 P体和/或SG的量化，分布和共定位是研究RNP颗粒的组成及其对基础细胞过程（如压力反应和翻译调节）的贡献的重要工具。在这个协议中，我们描述了一种量化线虫秀丽隐杆线虫体细胞中P体和SGs的方法。
背景 到目前为止，研究P体和SG的大多数方案是针对酵母或人类细胞系开发的（Buchan et al。，2010）。对多细胞生物体内的体细胞RNP颗粒的功能知之甚少。简单的模型生物体。线虫已广泛用于研究与P体和SG不同的种系特异性P颗粒，以及种系发育和功能的重要结构（Updike和Strome，2010）。虽然所提出的方法的原理可以应用于计数种系特异性P颗粒，但该方案集中于体细胞RNP颗粒的定量。几项研究已经确定了在C中通过miRNA途径的翻译失调的体细胞P体的保守功能。 ...
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