| Murine Hair Follicle Derived Stem Cell Transplantation onto the Cornea Using a Fibrin Carrier
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] The goal of this protocol is to establish a procedure for cultivating stem cells on a fibrin carrier to allow for eventual transplantation to the eye. The ability to transfer stem cells to a patient is critical for treatment for a variety of disorders and wound repair. We took hair follicle stem cells from the vibrissae of transgenic mice expressing a dual reporter gene under the control of the Tet-on system and the keratin 12 promoter (Meyer-Blazejewska et al., 2011). A clonal growth assay was performed to enrich for stem cells. Once holoclones formed they were transferred onto a fibrin carrier and cultivated to obtain a confluent epithelial cell layer. Limbal stem cell deficient (LSCD) mice were used as the transplant recipient in order to test for successful grafting and ...
[摘要] 该方案的目标是建立一种在纤维蛋白载体上培养干细胞以允许最终移植到眼睛的程序。 将干细胞转移给患者的能力对于治疗各种疾病和伤口修复至关重要。 我们在Tet-on系统和角蛋白12启动子（Meyer-Blazejewska等人，2011）的控制下从表达双报告基因的转基因小鼠的触须中取出毛囊干细胞。 进行克隆生长测定以富集干细胞。 一旦形成holoclones，将它们转移到纤维蛋白载体上并培养以获得融合上皮细胞层。 将角膜缘干细胞缺陷（LSCD）小鼠用作移植受体以测试移植成功和最终分化为角膜上皮表型。
【背景】干细胞被广泛用作治疗工具，因此递送手段是必不可少的。实际上，许多研究人员和公司正在寻找将细胞输送到人体内以优化细胞存活以及整合到宿主组织中的最佳方式。注射方法已广泛用于动物模型，但往往导致生存和整合差。目前正在使用利用生物材料和手术装置的技术。一种用于输送干细胞的技术是纤维蛋白载体。纤维蛋白凝胶是可降解的生物聚合物，其可粘附于允许细胞附着，迁移和增殖的天然组织（Ehrbar et al。，2005）。纤维蛋白凝胶具有许多优点，包括生物相容性，受控降解（Kjaergard等人，1994; Sidelmann等人，2000），均匀细胞分布和高细胞接种效率（Swartz ，2005）。已经将纤维蛋白凝胶用于治疗皮肤烧伤（Pellegrini等人，1999; ...
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| Intravenous Labeling and Analysis of the Content of Thymic Perivascular Spaces
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Following development in the thymus, T cells are thought to exit into the periphery predominantly through perivascular spaces (PVS). This exit route is used by conventional T cells, and likely also applies to unconventional T cell subsets, such as precursors of CD8αα and TCRγδ intraepithelial lymphocytes, regulatory T cells and natural killer T cells. Additional cell types might also be found in the PVS and initiate interactions with exiting T cells. The exact content of the PVS, and the processes within, are not well studied. To distinguish vascular from resident cells within various tissues by flow cytometry, intravenous (i.v.) labeling is becoming a commonly employed method. We recently used anti-CD45.2 antibodies and magnetic enrichment to further evaluate this technique, and compared ...
[摘要] 在胸腺发育后，T细胞被认为主要通过血管周围间隙（PVS）进入周边。 这种退路由常规T细胞使用，也可能适用于非常规T细胞亚群，例如CD8αα和TCRγδ上皮内淋巴细胞的前体，调节性T细胞和天然杀伤T细胞。 其他细胞类型也可能在PVS中发现并启动与退出T细胞的相互作用。 PVS的确切内容及其内部过程尚未得到充分研究。 为了通过流式细胞术将血管与各种组织中的驻留细胞区分开，静脉内（静脉内）标记正在成为常用方法。 我们最近使用抗CD45.2抗体和磁性富集来进一步评估这种技术，并比较胸腺和血液中的标记和未标记的细胞。 该测定可用于特异性研究胸腺PVS内的造血细胞亚群。
【背景】未成熟的胸腺细胞经历一系列成熟步骤，包括正向和负向选择，其消除了大部分发育中的T细胞。由此产生的成熟T细胞库因此形成朝向更高比例的有益克隆和减少比例的危险自反应克隆。胸腺还产生较少丰富的T细胞亚群，其通常用于维持免疫系统，组织和代谢稳态，包括：TCRγδ细胞，调节性T细胞（Treg），自然杀伤T细胞（NKT），上皮内淋巴细胞（IEL）和粘膜相关不变T（MAIT）细胞。成熟的胸腺细胞准备迁移到外周，上调表达识别鞘氨醇-1磷酸（S1P）的受体（S1PR1）的表达，S1P是血液中高浓度存在的脂质分子。 S1PR1 + T细胞沿着S1P梯度迁移并卷入血管循环中。
胸腺血管周围间隙（PVS）是实质和脉管系统之间的基膜分隔室。它们被认为促进了细胞的运输，特别是从胸腺移出的成熟T细胞（Mori等人，2007; ...
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| Simultaneous Intranasal/Intravascular Antibody Labeling of CD4+ T Cells in Mouse Lungs
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] CD4+ T cell responses have been shown to be protective in many respiratory virus infections. In the respiratory tract, CD4+ T cells include cells in the airway and parenchyma and cells adhering to the pulmonary vasculature. Here we discuss in detail the methods that are useful for characterizing CD4+ T cells in different anatomic locations in mouse lungs.
[摘要] 许多呼吸道病毒感染中CD4细胞反应已被证明是保护性的。在呼吸道中，CD4 + T细胞包括气道中的细胞和附着于肺血管的细胞和细胞。在这里，我们详细讨论了可用于表征小鼠肺不同解剖位置的CD4 + T细胞的方法。
背景 为了区分循环和组织中的记忆T细胞，已经开发了一种T细胞血管内染色的方法（Anderson等人，2012）。这种方法被广泛用于定义许多器官和组织（包括肺，脾和肠）的记忆T细胞。然而，呼吸道中的记忆T细胞位于三个独特的解剖位置，即气道，薄壁组织和肺血管。血管内染色不能区分气道和实质中的细胞，因为它们都是从循环中分离的，血管内施用的抗体不会污染这两个群体。我们设计了同时进行的鼻内/血管内抗体标记测定，可以使用最少量的抗体来标记和区分所有三个位置的细胞。
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