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Date:
2017-05-05
[Abstract] A mitochondrion is a dynamic intracellular organelle that actively divides and fuses to control its size, number and shape in cells. A regulated balance between mitochondrial division and fusion is fundamental to the function, distribution and turnover of mitochondria (Roy et al., 2015). Mitochondrial division is mediated by dynamin-related protein 1 (Drp1), a mechano-chemical GTPase that constricts mitochondrial membranes (Tamura et al., 2011). Mitochondrial membrane lipids such as phosphatidic acid and cardiolipin bind Drp1, and Drp1-phospholipid interactions provide key regulatory mechanisms for mitochondrial division (Montessuit et al., 2010; Bustillo-Zabalbeitia et al., 2014; Macdonald et al., 2014; Stepanyants et al., 2015; ...
[摘要] 线粒体是一种动态的细胞内细胞器，主动分裂和融合以控制细胞的大小，数量和形状。线粒体分裂和融合之间的调节平衡是线粒体功能，分布和周转的基础（Roy等，2015）。线粒体分化是由动力蛋白相关蛋白1（Drp1）介导的，其是限制线粒体膜的机械化学GTP酶（Tamura等人，2011）。线粒体膜脂质如磷脂酸和心磷脂结合Drp1，并且Drp1磷脂相互作用提供线粒体分裂的关键调控机制（Montessuit等人，2010; Bustillo-Zabalbeitia等人2014年; Macdonald等人，2014年; Stepanyants等人，2015; Adachi等人，2016）。在这里，我们描述了使用纯化的重组Drp1和具有定义的一组磷脂的合成脂质体定量测量Drp1与脂质的相互作用的生物化学实验。该测定使得可以定义蛋白质 - 脂质相互作用的特异性以及头基和酰基链的作用。
背景 蛋白质和膜脂质的相互作用对于细胞如细胞器分裂中生物膜的重塑至关重要。在线粒体分裂中，Drp1限制线粒体膜并驱动该膜重塑过程。我们最近显示，信号磷脂，磷脂酸与Drp1相互作用，并通过限制线粒体上的组装分裂机制（Adachi等人，2016）产生启动步骤。 Drp1识别磷脂酸的头基和酰基链。为了分析Drp1-磷脂酸结合，我们建立了几种蛋白质 - ...
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Date:
2016-11-20
[Abstract] Biological membranes are vital for diverse cellular functions such as maintaining cell and organelle structure, selective permeability, active transport, and signaling. The surface charge of the membrane bilayer plays a critical role in these myriad processes. For most biomembranes, the surface charge of anionic phospholipids contributes to the negative surface charge density within the interfacial region of the bilayer. To quantify surface charge, it is essential to understand the proton dissociation behavior of the titratable headgroups within such lipids. We describe a protocol that uses model membranes for electrokinetic zeta potential measurements coupled with data analysis using Gouy-Chapman-Stern formalism to determine the pKa value of the component lipids. A ...
[摘要] 生物膜对于多种细胞功能如维持细胞和细胞器结构，选择性渗透性，主动转运和信号传导至关重要。膜双层的表面电荷在这些无数过程中起关键作用。对于大多数生物膜，阴离子磷脂的表面电荷有助于在双层的界面区域内的负表面电荷密度。为了量化表面电荷，必须理解可滴定头基在这种脂质内的质子解离行为。我们描述了使用模型膜用于电动ζ电位测量以及使用Gouy-Chapman-Stern形式的数据分析以确定组分脂质的p a 值的方案。提供了由单阴离子脂质磷脂酰甘油组成的均匀双层的详细实施例。这种方法可以适用于测量具有异质脂质组合的双层，以及用于在头部组中具有多个可滴定位点的脂质（例如，心磷脂）。
[背景] 磷脂是生物膜的中心结构单元（图1）。作为两亲性分子，每个包含由酰基链组成的疏水区和由极性头基组成的亲水区（图1A）。一些磷脂头基是两性离子的，在生理pH下含有带正电和带负电的官能团（图1B），而其它磷脂头基是酸性的，带有整体形式的负电荷（图1C）。生物膜内的脂质作为层状组件稳定存在，形成双层，其中两个叶的酰基链相互作用形成疏水核和由极性头基组成的两个界面区域（图1D）。大多数天然存在的生物膜含有一定百分比的酸性磷脂;因此，它们的脂质组成赋予界面区域净负电荷（Gennis，1989; ...
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