| Isolation and Purification of Schwann Cells from Spinal Nerves of Neonatal Rat
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] Primary cultured Schwann cells (SCs) are widely used in the investigation of the biology of SC and are important seed cells for neural tissue engineering. Here, we describe a novel protocol for harvesting primary cultured SCs from neonatal Sprague-Dawley (SD) rats. In the present protocol, dissociated SCs are isolated from the spinal nerves of neonatal rats and purified by the treatment of cytosine arabinoside (AraC).
[摘要] 原代培养的雪旺氏细胞（SCs）广泛用于SC的生物学研究，是神经组织工程的重要种子细胞。 在这里，我们描述了从新生Sprague-Dawley（SD）大鼠中收获原代培养的SC的新方案。 在本方案中，解离的SCs从新生大鼠的脊神经中分离并通过治疗阿糖胞苷（AraC）进行纯化。
【背景】SC是周围神经系统（PNS）的神经胶质细胞。主要SCs的分离和纯化是研究SC生物学的关键步骤。此外，纯化的原代培养的SC是用于神经组织工程的重要种子细胞。迄今为止，已经基于Brockes（Brockes等人，1979）的方法报道了培养SC的各种方法。通过报道的方法，坐骨神经主要用于SC隔离，因为它们尺寸大并且可以容易地获得。然而，坐骨神经的SC容易被成纤维细胞污染，因为结缔组织难以清除。特别是神经管和神经束是成纤维细胞的主要来源。没有特殊处理，污染的成纤维细胞比SCs快得多，并且将很快成为培养物中主要的细胞。在过去几十年中，已经开发出许多用于从污染成纤维细胞中分离SC的纯化方法。这些纯化方法的细节包括单一或组合的抗有丝分裂处理（Wood，1976），抗体介导的细胞溶解（Brockes等人，1979），免疫选择（Assouline等人，，1983; ...
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| Preparation of Teased Nerve Fibers from Rat Sciatic Nerve
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Author:
Date:
2017-10-05
[Abstract] Compared to tissue sectioning techniques, the technique of teasing single nerve fibers provides a better way to understand the structures of myelin sheaths and axons of the peripheral myelinated nerves. This protocol describes a method for preparation of teased single nerve fibers from rat sciatic nerve. In this protocol, fixed nerves are teased into single individual fibers and arranged onto adhesion microscope slides for further immuno-staining.
[摘要] 与组织切片技术相比，单神经纤维的技术提供了更好的方法来了解髓鞘和外周髓鞘神经的轴突的结构。 该方案描述了一种从大鼠坐骨神经制备调节的单神经纤维的方法。 在该方案中，将固定的神经梳理成单个单独的纤维并排列在粘附显微镜载玻片上用于进一步的免疫染色。
【背景】外周神经系统中的雪旺氏细胞围绕轴突包裹以形成绝缘髓鞘，其允许动作电位的快速传导。 显着的多层髓鞘由精细的结构组成，包括紧密的鞘，施密特 - 兰特曼切口，Cajal带，内外侧mesaxons，以及在paranodal区域的结构。 为了阐明外周神经有髓纤维的正常和异常结构，需要使用切割的神经纤维。 拔牙纤维的方法已被广泛应用于人类和啮齿类动物周围神经的研究。 在这个协议中，我们描述了一种将周围神经分为单纤维的方法，用于对周围神经的轴突或髓鞘进行进一步的形态学研究。
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| Primary Culture of Mouse Neurons from the Spinal Cord Dorsal Horn
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Primary afferents of sensory neurons mainly terminate in the spinal cord dorsal horn, which has an important role in the integration and modulation of sensory-related signals. Primary culture of mouse spinal dorsal horn neuron (SDHN) is useful for studying signal transmission from peripheral nervous system to the brain, as well as for developing cellular disease models, such as pain and itch. Because of the specific features of SDHN, it is necessary to establish a reliable culture method that is suitable for testing neural response to various external stimuli in vitro.
[摘要] 感觉神经元的主要传入主要终止于脊髓背角，其在感觉相关信号的整合和调节中具有重要作用。小鼠脊髓背角神经元（SDHN）的原代培养可用于研究从周围神经系统到脑的信号传递，以及用于发展诸如疼痛和瘙痒的细胞疾病模型。由于SDHN的具体特征，有必要建立一种可靠的培养方法，适合于测试体外各种外部刺激的神经反应。
背景 不同于目前用于培养分离的小鼠来自海马或大脑皮质的原代神经元的方案，报道了很少的在体外培养SDHN的方法。该协议主要基于以前描述的方法（Hu et al。，2003; Hugel和Schlichter，2000）。在这里，我们进行了一些修改，包括试剂，食谱，解剖和描述从新生小鼠的初步SDHN的解剖和培养的分步程序。在该方案中，使用来自新鲜脊髓背角组织的酶（木瓜蛋白酶）消化方法直接获得神经元。体外SDHN的培养可以用于进一步的实验，例如电生理记录，免疫细胞化学和Ca 2+成像，其更好地支持脊髓中的细胞行为。
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