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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] The Actin-Related Protein 2/3 (ARP2/3) complex is an actin nucleator that generates a branched actin network in mammalian cells. In addition to binding nucleation promoting factors, LeClaire et al. demonstrated that its phosphorylation state is essential key for its activity (LeClaire et al., 2008). In cells, the ARP2/3 complex is phosphorylated on threonine and tyrosine residues of the ARP2, ARP3, and ARPC1 subunits (Vadlamudi et al., 2004; LeClaire et al., 2008; Narayanan et al., 2011; LeClaire et al., 2015). In particular, phosphorylation of threonine 237 and 238 of the ARP2 subunit is necessary to allow a change in the ARP2/3 complex structure to its active conformation (Narayanan et al., 2011; LeClaire et al., ...
[摘要] 肌动蛋白相关蛋白2/3（ARP2 / 3）复合物是在哺乳动物细胞中产生支链肌动蛋白网络的肌动蛋白成核剂。除了结合成核促进因子之外，LeClaire等人。证明其磷酸化状态是其活性的关键（LeClaire等人，2008）。在细胞中，ARP2 / 3复合物在ARP2，ARP3和ARPC1亚基的苏氨酸和酪氨酸残基上磷酸化（Vadlamudi等人，2004; LeClaire等人）。 ，2008; Narayanan等人，2011; LeClaire等人，2015）。特别地，ARP2亚基的苏氨酸237和238的磷酸化对于允许将ARP2 / 3复合物结构改变为其活性构象是必要的（Narayanan等人，2011; LeClaire等人al ，2015）。虽然对于真核细胞中的许多功能很重要，但ARP2 / 3复合物活性也有利于多种细胞病原体（Haglund和Welch，2011; Welch和Way，2013）。最近，我们证明细菌病原体，嗜肺军团菌，使用注射在宿主细胞质细胞中的细菌蛋白激酶来操纵ARP2 / 3复合磷酸化状态（Michard等人，2015） ）。在这里，我们描述如何测试细菌蛋白激酶或另一种蛋白激酶在体外上下文中磷酸化ARP2 / 3复合物的能力。首先，产生和纯化ARP2 / 3复合物和细菌蛋白激酶。然后，将纯化的蛋白质在ATP存在下培养，并通过Western印迹分析ARP2 / ...
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Author:
Date:
2014-12-05
[Abstract] TGFβ is part of a growth factor superfamily which modulates cell growth, differentiation, adhesion, migration, ECM synthesis and apoptosis (Massague, 1998; Siegel and Massague, 2003). Free TGFβ binds to its high affinity TGFβ receptor, a receptor serine/threonine kinase, inducing phosphorylation of Smad2/3 which subsequently forms a complex with Smad4 to translocate to the nucleus where it interacts with multiple co-activators and repressors generating distinct transcriptional responses.
Indeed, TGFβ signaling shows a remarkable cellular context dependency and apparent multifunctionality: e.g. TGFβ is able to inhibit cell proliferation in many epithelial cells but can also enhance proliferation in fibroblasts and cell growth in endothelial cells (Guasch et al., ...
[摘要] TGFβ是调节细胞生长，分化，粘附，迁移，ECM合成和凋亡的生长因子超家族的一部分（Massague，1998; Siegel和Massague，2003）。游离TGFβ结合到其高亲和力TGFβ受体，一种受体丝氨酸/苏氨酸激酶，诱导Smad2/3的磷酸化，随后与Smad4形成复合物转移到细胞核，其中它与多种共激活剂和阻遏物相互作用产生不同的转录反应。实际上，TGFβ信号传导显示出显着的细胞环境依赖性和表观多功能性：例如TGFβ能够抑制许多上皮细胞中的细胞增殖，但也可以增强成纤维细胞中的增殖和内皮细胞中的细胞生长（Guasch等人，2007; Xiao等人，2012年）;它增强干细胞多能性，但促进其他细胞的分化（Park，2011）;在癌症发展中，它抑制恶变前细胞增殖，但同时促进转移到转移表型（Chaudhury和Howe，2009）。
TGFβ刺激测定监测细胞对TGFβ的反应性。在TGFβ刺激时，可以分析短期效应例如Smad2磷酸化和长期效应例如细胞增殖。将描述用于小鼠角质形成细胞的测定，其中TGFβ强烈抑制细胞增殖，但是这两种测定也适用于其它细胞类型。
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