| Determination of Hydrodynamic Radius of Proteins by Size Exclusion Chromatography
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Size exclusion chromatography (SEC) or gel filtration is a hydrodynamic technique that separates molecules in solution as a function of their size and shape. In the case of proteins, the hydrodynamic value that can be experimentally derived is the Stokes radius (Rs), which is the radius of a sphere with the same hydrodynamic properties (i.e., frictional coefficient) as the biomolecule. Determination of Rs by SEC has been widely used to monitor conformational changes induced by the binding of calcium (Ca2+) to many Ca2+-sensor proteins. For this class of proteins, SEC separation is based not just on the variation in protein size following Ca2+ binding, but likely arises from changes in the hydration shell structure.
This ...
[摘要] 尺寸排阻色谱法（SEC）或凝胶过滤是一种流体动力学技术，它将溶液中的分子作为其尺寸和形状的函数。在蛋白质的情况下，可以通过实验得出的流体动力学值是斯托克斯半径（R s），它是具有相同流体力学性质的球体的半径（即， >摩擦系数）作为生物分子。通过SEC测定R s已经被广泛用于监测由钙（Ca 2+）与许多Ca 2+连接引起的构象变化传感器蛋白。对于这类蛋白质，SEC分离不仅基于Ca 2 + 结合后的蛋白质尺寸变化，而且可能来自水合壳结构的变化。
该方案旨在使用快速蛋白质液相色谱（FPLC）系统对预填充柱进行凝胶过滤实验，以确定蛋白质的R 1，其中一些适用于Ca 2 + 传感器蛋白。
凝胶过滤基于其相对的能力分离不同大小和形状的分子，以穿透具有明确孔径的多孔珠床，其识别分馏范围。大于完全排除进入孔隙的分馏范围的分子快速流过色谱柱，首先以空间体积（V 0 O）（其为支持颗粒外的间隙体积）洗脱。能够扩散到珠的孔中的小于分级范围的分子具有可用于流动相的总体积，因此它们更缓慢地移动通过床并最后洗脱。具有中等维度的分子将以包含在流动相可利用的空隙体积和总体积之间的洗脱体积（V e e e e）被洗脱（分子越小，其进入孔隙越大矩阵，因此其V e e越大）。
蛋白质的分子量可以通过比较其洗脱体积参数K ...
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| Competitive ELISA for Protein-lipopolysaccharide (LPS) Binding
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Author:
Date:
2014-11-20
[Abstract] Lipopolysaccharide is the major constituent of the outer membrane of gram-negative bacteria and, once released from the bacterial surface into the bloodstream, is a potent activator of the host immune system, which can lead to septic shock. LPS has a hydrophilic region consisting of a repeating oligosaccharide that is strain-specific (O-antigen) and a core polysaccharide, which is covalently linked to a hydrophobic lipid moiety (lipid A). Lipid A is the most conserved part and is responsible for the toxicity of LPS. Therefore, finding molecules able to bind to this region and neutralize LPS toxicity is of relevant interest as it may provide new therapies to prevent septic shock (Chen et al., 2006). Several proteins and peptides were reported to bind LPS and alter its toxicity ...
[摘要] 脂多糖是革兰氏阴性细菌外膜的主要成分，一旦从细菌表面释放到血液中，是宿主免疫系统的有效激活剂，可导致败血性休克。 LPS具有由与疏水性脂质部分（脂质A）共价连接的作为菌株特异性（O-抗原）的重复寡糖和核心多糖组成的亲水性区域。脂质A是最保守的部分，负责LPS的毒性。因此，寻找能够结合该区域并中和LPS毒性的分子是有兴趣的，因为它可能提供新的治疗方法来预防败血性休克（Chen et al。，2006）。报道了几种蛋白质和肽结合LPS并改变其对还原和甚至增强的毒性（Brandenburg等，1998），例如血清白蛋白（Ohno和Morrison，1989），脂多糖结合蛋白（LBP）（de Haas等人，1999），酪蛋白（López-Expósito等，2008），溶菌酶，抗生素多粘菌素B和抗菌肽（Chen等，2006）。虽然这些蛋白质中的一些是中性的，甚至阴离子/酸性（pI <7）（jang et="" al。，2009），由于lps的两亲性结构和脂质a上带负电荷的磷酸酯基团的存在是最重要的因素被认为与lps最佳结合的是阳离子/碱性（pi=""> ...
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