| Characterization of Hippocampal Adult-borne Granule Cells in a Transient Cerebral Ischemia Model
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Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] Long-term consequences of stroke significantly impair the quality of life in a growing population of stroke survivors. Hippocampal adult neurogenesis has been hypothesized to play a role in the pathophysiology of cognitive and neuropsychiatric long-term sequelae of stroke. Reliable animal models of stroke are paramount to understanding their biomechanisms and to advancing therapeutic strategies. We present a detailed protocol of a transient cerebral ischemia model which does not cause direct ischemic damage in the hippocampus, allowing investigations into the pathophysiology of long-term neurocognitive deficits of stroke. Furthermore, we describe a protocol for obtaining acute hippocampal slices for the purpose of electrophysiological and morphological characterization of adult-borne ...
[摘要] [摘要]中风的长期后果严重损害了越来越多的中风幸存者的生活质量。假定海马成年神经发生在中风的认知和神经精神病学长期后遗症的病理生理学中起作用。可靠的中风动物模型对于理解其生物机制和推进治疗策略至关重要。我们提出 暂时性脑缺血模型的详细协议，该模型不会在海马体中引起直接缺血损伤，从而可以研究中风的长期神经认知缺陷的病理生理学。此外，我们描述了一种用于获取成人海马颗粒细胞的电生理学和形态学特征的急性海马切片的协议。还讨论了与从小细胞（例如未成熟的成年颗粒细胞）进行电生理记录有关的特殊性。本协议可以通过多模式研究（行为，形态结构，生化）加以补充，以期有希望促进研究和中风的长期后遗症的发展以及发现新的治疗机会。
[背景]中风是在发达国家发病率和死亡率的重要原因引起急性和延迟赤字。虽然针对缺血性中风恢复血流的干预策略在降低急性发病率和死亡率方面已经变得更加有效，但中风的长期后果（如中风后抑郁和中风后认知功能障碍和痴呆症）目前正在逃避临床治疗（Wang等。，2010; Loubinoux等人，2012; Mijajlovic ...
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| Embryonic Intravitreous Injection in Mouse
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] Axons of retinal ganglion cells (RGCs) relay visual information from the retina to lateral geniculate nucleus (LGN) and superior colliculus (SC), which are two major image-forming visual nuclei. Wiring of these retinal projections completes before vision begins. However, there are few studies on retinal axons at embryonic stage due to technical difficulty. We developed a method of embryonic intravitreous injection of dyes in mice to visualize retinal projections to LGN and SC. This study opens up the possibility of understanding early visual circuit wiring in mice embryos.
[摘要] 视网膜神经节细胞（RGC）的轴突将视觉信息从视网膜传递到外侧膝状核（LGN）和上丘（SC），这是两个主要的成像视觉核。 在视力开始之前完成这些视网膜投射的布线。 然而，由于技术困难，很少有关于胚胎期视网膜轴突的研究。 我们开发了一种胚胎玻璃体内注射染料的方法，用于观察LGN和SC的视网膜投射。 这项研究开辟了理解小鼠胚胎早期视觉电路布线的可能性。
【背景】早在胚胎第14.5天（E14.5）小鼠中，视网膜轴突开始向LGN和SC投射。 为了研究胚胎中的轴突投射，需要在注射手术前保持胚胎存活至少10小时，玻璃内注射染料。 以前的研究表明，胚胎可以使用含氧小鼠血清进行体外培养。 然而，营养多样性，氧饱和度和温度调节等问题会影响胚胎的生理状况。 在我们的研究中，我们通过胚胎中的子宫壁和眼睑进行玻璃体内注射，并在注射后将它们保存在子宫中。 从E15.5到E18.5很好地标记了对LGN和SC的视网膜轴突投射。
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| Photothrombotic Induction of Capillary Ischemia in the Mouse Cortex during in vivo Two-Photon Imaging
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Photothrombosis of blood vessels refers to the activation of a circulating photosensitive dye with a green light to induce clotting in vivo (Watson et al., 1985). Previous studies have described how a focused green laser could be used to noninvasively occlude pial arterioles and venules at the brain surface (Schaffer et al., 2006; Nishimura et al., 2007; Shih et al., 2013). Here we show that small regions of the capillary bed can similarly be occluded to study the ischemic response within the capillary system of the mouse cerebral cortex. The advantage of this approach is that the ischemic zone is restricted to a diameter of approximately 150-250 μm. This permits higher quality two-photon imaging of degenerative processes that would be ...
[摘要] 血管的血栓形成是指用绿光激活循环的光敏染料，以在体内诱发凝血（Watson等人，1985）。以前的研究已经描述了如何将聚焦的绿色激光器用于非侵入性地封闭脑表面的小动脉和小静脉（Schaffer等人，2006; Nishimura等人， 2007; Shih等人，2013）。这里我们显示毛细血管床的小区域可以类似地闭塞，以研究小鼠大脑皮质毛细管系统内的缺血反应。这种方法的优点是缺血区被限制在约150-250μm的直径。这允许退化过程的更高质量的双光子成像，否则由于过度的光子散射，否则难以用大规模中风的模型来可视化。毛细血管闭塞的结果是血脑屏障（BBB）的泄漏。在这里，通过使用双光子成像数据集，我们展示了如何通过确定静脉内染料外渗的空间范围和定位来量化毛细血管渗漏。
【背景】存在许多动物模型通过闭塞主要大脑动脉大规模诱发缺血（Carmichael，2005）。然而，在体内双光子成像中不能获得中风的一些方面。在经历更严重缺血的区域，由于离子不平衡而导致细胞膨胀，这种水肿过程有助于增加光散射，大大降低了体内双光子成像的质量和深度。较小的局部缺血区域将减少光子散射，并且仍然允许与局部缺血相关的神经血管变化随着时间的推移在体内更清晰地显现。
我们最近表明，空间受限区域的缺血可以通过聚焦的血栓形成的皮质毛细血管床照射产生（Underly等人，2017）。毛细血管闭塞是高度可重复的，可以针对特定的位置，并通过颅骨成像窗口在精确的时间开始。所得到的缺血区域占据通过典型颅窗可接近的面积的1％（图1D和1E），允许在一个窗口中检查多个笔触。 ...
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