| Isolation of Murine Alveolar Type II Epithelial Cells
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] We have optimized a protocol for isolation of alveolar type II epithelial cells from mouse lung. Lung cell suspensions are prepared by intratracheal instillation of dispase and agarose followed by mechanical disaggregation of the lungs. Alveolar type II epithelial cells are purified from these lung cell suspensions through magnetic-based negative selection using a Biotin-antibody, Streptavidin-MicroBeads system. The purified alveolar type II epithelial cells can be cultured and maintained on fibronectin-coated plates in DMEM with 10% FBS. This protocol enables specific investigation of alveolar type II epithelial cells at molecular and cellular levels and provides an important tool to investigate in vitro the mechanisms underlying lung pathogenesis.
[摘要] 我们优化了从小鼠肺分离肺泡II型上皮细胞的方案。通过气管内滴注分泌酶和琼脂糖，然后机械解聚肺来制备肺细胞悬浮液。通过使用生物素抗体Streptavidin-MicroBeads系统的磁性阴性选择，从这些肺细胞悬液中纯化肺泡II型上皮细胞。可以将纯化的肺泡II型上皮细胞培养并维持在含有10％FBS的DMEM中的纤连蛋白包被的平板上。该方案能够在分子和细胞水平上对肺泡II型上皮细胞进行特异性研究，并提供了一种重要的工具，用于在体外研究肺发病机制的机制。
背景 肺泡II型上皮细胞在肺泡完整性维持，表面活性蛋白合成和分泌中起关键作用，并防止细菌和病毒的肺部感染。最近使用小鼠肺癌模型的研究已经证明，肺泡II型上皮细胞是由化学致癌物质和致癌突变诱导的腺瘤/腺癌的关键细胞（Qu 等人，2015; Zhou > et al。，2015和2017）。为了进一步扩大我们对肺泡II型上皮细胞在体内肺发病机制中的作用的理解，需要分离肺泡II型上皮细胞以允许体外精确的机理分析， EM>。基于先前的研究（Corti等人，1996; Rice等人，2002），在我们的实验室中使用了一种修饰的方法来分离高度纯化的，可行的和可培养的来自小鼠的肺泡II型上皮细胞（Zhou等人，2015; Sun等人，2016）。
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| Simultaneous Intranasal/Intravascular Antibody Labeling of CD4+ T Cells in Mouse Lungs
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] CD4+ T cell responses have been shown to be protective in many respiratory virus infections. In the respiratory tract, CD4+ T cells include cells in the airway and parenchyma and cells adhering to the pulmonary vasculature. Here we discuss in detail the methods that are useful for characterizing CD4+ T cells in different anatomic locations in mouse lungs.
[摘要] 许多呼吸道病毒感染中CD4细胞反应已被证明是保护性的。在呼吸道中，CD4 + T细胞包括气道中的细胞和附着于肺血管的细胞和细胞。在这里，我们详细讨论了可用于表征小鼠肺不同解剖位置的CD4 + T细胞的方法。
背景 为了区分循环和组织中的记忆T细胞，已经开发了一种T细胞血管内染色的方法（Anderson等人，2012）。这种方法被广泛用于定义许多器官和组织（包括肺，脾和肠）的记忆T细胞。然而，呼吸道中的记忆T细胞位于三个独特的解剖位置，即气道，薄壁组织和肺血管。血管内染色不能区分气道和实质中的细胞，因为它们都是从循环中分离的，血管内施用的抗体不会污染这两个群体。我们设计了同时进行的鼻内/血管内抗体标记测定，可以使用最少量的抗体来标记和区分所有三个位置的细胞。
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| Cell-to-cell DNA Transfer among Thermus Species
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] The ability to transfer DNA via direct cell-to-cell contact-dependent process similar to conjugation has been described in Thermus thermophilus (Tth). Here, we detail the mating experiment protocol involving the lateral transfer of thermostable antibiotic resistance markers (i.e., kanamycin: KmR; hygromycin: HygR) between Thermus cells, enabling the selection and quantification of the transfer frequencies. Briefly, liquid cultures of both mates are mixed and laid onto a nitrocellulose filter on a TB plate. After incubation at 60 °C, filters are resuspended upon selective plating. The contribution of DNA uptake by transformation is abolished by the addition of DNase I to the mix. This protocol can be used for the transfer of large DNA ...
[摘要] 通过与共轭相似的直接细胞间接触依赖性过程转移DNA的能力已在Thermus thermophilus（Tth）中描述。在这里，我们详细描述了包括热稳定抗生素抗性标记（即卡那霉素：Km），潮霉素：Hyg R 的横向转移的交配实验方案>）在 细胞之间，使得能够选择和量化转移频率。简言之，将两种配合物的液体培养物混合并铺在TB板上的硝酸纤维素滤膜上。在60℃温育后，在选择性平板培养基上重悬浮过滤器。通过向混合物中加入DNA酶I消除通过转化的DNA摄取的贡献。该方案可用于将大DNA片段（> 10kb）转移到Thermus 物种。
[背景] 是大多数细菌水平基因转移的主要机制，是一种高度专业化的过程，通过其DNA在直接接触的两个细胞之间转移（Lederberg和Tatum，1946）。经典缀合涉及DNA分子（通常是质粒编码的）从供体到受体细胞的单向转移，其仍然是被动的。然而，已经描述了用于多种细菌的替代模型。在实验室中，缀合实验对于标志物交换诱变是有效的。在其它遗传转移方法中，缀合在细菌包膜的最小破坏和转移大DNA片段（包括大的染色体区域（> 10kb））的可行性方面是有利的。 在T之间的共轭样过程。嗜热细菌在十年前被报道，其中染色体标记在重组HFR - ...
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