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Author:
Date:
2012-08-20
[Abstract] This protocol describes investigation of protein-protein interactions in baker yeast by co-immunoprecipitation (CoIP). CoIP is a technique to identify physiologically relevant protein-protein interactions in the cell. The interesting protein can be isolated out of solution using antibody that specifically binds to that particular protein (antigene protein). The partner proteins that are bound to a specific target protein can be co-immunoprecipitated together with an antigen. These protein complexes can then be analyzed to identify new binding partners, binding affinities, the kinetics of binding and the function of the target protein. Here I describe the protocols that allow to immunoprecipitate different protein complexes, for example NAC complex (Panasenko et al., 2009), ...
[摘要] 该协议描述了通过共免疫沉淀（CoIP）对面包酵母中蛋白质 - 蛋白质相互作用的研究。 CoIP是鉴定细胞中生理相关的蛋白质 - 蛋白质相互作用的技术。 使用特异性结合该特定蛋白（抗原蛋白）的抗体可以从溶液中分离出感兴趣的蛋白。 与特定靶蛋白结合的伴侣蛋白可以与抗原一起免疫共沉淀。 然后可以分析这些蛋白质复合物以鉴定新的结合配偶体，结合亲和力，结合的动力学和靶蛋白的功能。 这里我描述允许免疫沉淀不同蛋白复合物的方案，例如NAC复合物（Panasenko等人，2009），Ccr4-Not复合物（Panasenko和Collort，2011），核糖体（Panasenko和Collort ，2012），并调查他们的合作伙伴。 对于每个CoIP，我使用不同的裂解缓冲液，如下文配方中所示。
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