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Corning® 100 mm TC-treated Culture Dish

Corning ® 100mm TC处理培养皿

Company: Corning
Catalog#: 430167
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Other protocol()

Retroviral Capsid Core Stability Assay
Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract]  Structural stability of the capsid core is a critical parameter for the productive infection of a cell by a retrovirus. Compromised stability can lead to premature core disassembly, exposure of replication intermediates to cytosolic nucleic acid sensors that can trigger innate antiviral responses, and failure to integrate the proviral genome into the host DNA. Thus, core stability is a critical feature of viral replicative fitness. While there are several well-described techniques to assess viral capsid core stability, most are generally time and labor intensive. Recently, our group compared the relative stability of murine leukemia virus capsid cores using an in vitro detergent-based approach combined with ultracentrifugation against the popular fate of capsid assay. We found ... [摘要]  衣壳核心的结构稳定性是逆转录病毒对细胞的生产性感染的关键参数。受损的稳定性可导致核心过早解体,将复制中间体暴露于细胞溶质核酸传感器,其可触发先天的抗病毒反应,并且不能将原病毒基因组整合到宿主DNA中。因此,核心稳定性是病毒复制适应性的关键特征。虽然有几种充分描述的技术来评估病毒衣壳核心稳定性,但大多数通常是时间和劳动密集型的。最近,我们小组使用基于体外洗涤剂的方法结合超速离心法对衣壳测定的流行命运比较了鼠白血病病毒衣壳核心的相对稳定性。我们发现两种方法都得出了类似的结论,尽管第一种方法是比较显示核心稳定性差异的病毒突变体时评估相对衣壳核心稳定性的一种非常简单和快速的方法。

【背景】逆转录病毒已经进化出复制周期,在规避宿主抗病毒反应方面表现优异。逆转录病毒开发的一种策略是将其复制中间体与胞质核酸传感器如cGAS,TREX1,IFI203和DDX41屏蔽起来(Yan et al。,2010; Gao et al。,2013; Lahaye et al。,2013; Stavrou et al。,2015)。在复制过程中,逆转录病毒在细胞质中产生RNA-DNA杂合体和未甲基化的双链前病毒DNA,这是先天免疫传感器的常见靶标(Yan et al。,2010; Gao et al。,2013; Lahaye et ...

Cell Synchronization by Double Thymidine Block
Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract]  Cell synchronization is widely used in studying mechanisms involves in regulation of cell cycle progression. Through synchronization, cells at distinct cell cycle stage could be obtained. Thymidine is a DNA synthesis inhibitor that can arrest cell at G1/S boundary, prior to DNA replication. Here, we present the protocol to synchronize cells at G1/S boundary by using double thymidine block. After release into normal medium, cell population at distinct cell cycle phase could be collected at different time points. [摘要]  细胞同步广泛用于研究涉及细胞周期进程调节的机制。 通过同步,可以获得不同细胞周期阶段的细胞。 胸苷是一种DNA合成抑制剂,可在DNA复制前阻止细胞在G1 / S边界。 在这里,我们提出了使用双胸苷阻滞同步G1 / S边界细胞的协议。 释放到正常培养基中后,可以在不同的时间点收集不同细胞周期阶段的细胞群。

【背景】细胞周期和细胞分裂是细胞生物学的核心。为了构建多细胞生物体,细胞复制对于产生可以执行特定功能的特化细胞是必需的。正常细胞周期由间期(G1期,S期和G2期)和有丝分裂期(M期)组成(Rodríguez-Ubreva et al。,2010;Léger et al。 ,2016)。在间期期间,遗传物质被复制并使一切为有丝分裂做好准备。然而,在有丝分裂期,重复的染色体被分离并分配到子细胞中(Sakaue-Sawano 等人,,2008)。

为了精确保存遗传信息,必须严格控制细胞周期进程。细胞周期蛋白/ CDK复合物通过在各自阶段快速促进活动来控制细胞周期进展,并且当它们的阶段完成时迅速失活(Graña和Reddy,1995)。

细胞同步对于研究细胞周期调节事件特别有用。使用不同的方法,细胞可以在不同的细胞周期阶段同步。治疗作为微管形成抑制剂的诺考达唑可以使细胞处于G2 / M期同步(Ho et ...

Selective Isolation of Retroviruses from Extracellular Vesicles by Intact Virion Immunoprecipitation
Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract]  There exists a wide variety of techniques to isolate and purify viral particles from cell culture supernatants. However, these techniques vary greatly in ease of use, purity, yield and impact on viral structural integrity. Most importantly, it is becoming evident that secreted extracellular vesicles (EVs) co-purify with retroviruses using nearly all purification methods due to nearly indistinguishable biophysical characteristics such as size, buoyant density and nucleic acid content. Recently, our group has illustrated a means of isolating intact and highly enriched retroviral virions from EV-containing cell supernatants using an immunoprecipitation approach targeting the viral envelope glycoprotein of the Moloney Murine Leukemia Virus (Renner et al., 2018). This technique, that ... [摘要]  存在多种从细胞培养上清液中分离和纯化病毒颗粒的技术。然而,这些技术在易用性,纯度,产量和对病毒结构完整性的影响方面差异很大。最重要的是,由于几乎无法区分的生物物理特征,例如大小,浮力密度和核酸含量,使用几乎所有纯化方法分泌的细胞外囊泡(EV)与逆转录病毒共同纯化变得明显。最近,我们小组已经阐明了一种利用针对Moloney鼠白血病病毒的病毒包膜糖蛋白的免疫沉淀方法从含有EV的细胞上清液中分离完整和高度富集的逆转录病毒病毒颗粒的方法(Renner et al。, 2018)。这种技术,我们称之为完整的病毒粒子免疫沉淀(IVIP),使我们能够表征这些逆转录病毒表面上表位的可及性,并评估病毒包膜中病毒编码的整合膜蛋白Glycogag(gPr80)的方向。该方案的正确实施使得能够快速,简单且可重复地制备完整且高度纯化的逆转录病毒颗粒,其没有可检测的EV污染物。

【背景】广泛使用的分离逆转录病毒的方法,如人类免疫缺陷病毒(HIV)和小鼠白血病病毒(MLV),包括沉淀,色谱,超滤,超速离心,以及各种其他粒子分离方法(评论在Nestola et al。,2015)。虽然每种技术都有其特定的优点,缺点和局限性,但所有方法的共同关注点是细胞分泌的细胞外囊泡(EV)的共同纯化。

EV构成由所有细胞类型分泌的膜衍生囊泡的异质群体(Yanez-Mo ...

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