| An Optimized CTAB Method for Genomic DNA Extraction from Freshly-picked Pinnae of Fern, Adiantum capillus-veneris L.
|
|
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] As the sister clade of seed plants, ferns are significant materials for plant phylogeny research. However, the genomic DNA extraction protocol for fern samples like modified CTAB method still lacks robustness. Here, we found that the amount and condition of the pinnae samples are critical for gDNA extraction in fern, Adiantum capillus-veneris L. In 500 μl CTAB solution, the recommended amount of pinnae is about 10-20 mg (2-3 pieces). The condition of the pinnae must be instantly-picked from a plant cultivated in a suitable environment. With these factors under control, it is highly reproducible to get the high-quality gDNA with low degradation rate
[摘要] 作为种子植物的姐妹分支，蕨类植物是植物系统发育研究的重要材料。 然而，像改良CTAB方法的蕨类样品的基因组DNA提取方案仍然缺乏稳健性。 在这里，我们发现羽片样品的数量和条件对于蕨类植物， Adiantum capillus-veneris L中的gDNA提取至关重要。在500μlCTAB溶液中，推荐的羽片量约为10-20 mg（2-3片）。 必须从在合适环境中栽培的植物中立即采摘羽片的状况。 在控制这些因素的情况下，获得具有低降解率的高质量gDNA具有高度可重复性
【背景】CTAB方法已应用于 Adiantum capillus-veneris L的gDNA提取（Han et al 。，2012; Li et al 。，2017年）。 然而，该方案在我们的实验中仍显示出不稳定性和高降解率。 蕨类植物的羽片积聚了大量的次级代谢产物，如多糖和多酚，这对DNA提取不利（Ponnusamy et al。，2015）。
为了提高gDNA提取的稳健性，我们基本上从两个方面对协议进行了优化：1）减少材料用量，仅使用2-3个羽片（约10-20毫克）。 2）必须从在适宜的培养环境（温度：25℃，湿度：65％，16小时白光/ 8小时黑暗处理）中培养的植物中新鲜采摘羽片，并立即用于DNA提取。 ...
|
|
|
| GUS Staining of Guard Cells to Identify Localised Guard Cell Gene Expression
|
|
Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Determination of a gene expression in guard cells is essential for studying stomatal movements. GUS staining is one means of detecting the localization of a gene expression in guard cells. If a gene is specially expressed in guard cells, the whole cotyledons or rosette leaf can be used for GUS staining. However, if a gene is expressed in both mesophyll and guard cells, it is hard to exhibit a clear expression of the gene in guard cells by a GUS staining image from leaf. To gain a clear guard cell GUS image of small G protein ROP7, a gene expressed in both mesophyll and guard cells, we peeled the epidermal strips from the leaf of 3-4 week-old plants. After removing the mesophyll cells, the epidermal strips were used for GUS staining. We compared the GUS staining images from ...
[摘要] 保卫细胞中基因表达的测定对于研究气孔运动至关重要。 GUS染色是检测保卫细胞中基因表达定位的一种手段。如果在保卫细胞中特异性表达基因，则可以将整个子叶或玫瑰花叶用于GUS染色。然而，如果在叶肉和保卫细胞中表达基因，则难以通过来自叶的GUS染色图像在保护细胞中表达该基因的清楚表达。为了获得清晰的保护细胞GUS图像的小G蛋白ROP7 ，一种在叶肉和保卫细胞中表达的基因，我们从3-4周龄的植物的叶片剥离表皮条。去除叶肉细胞后，将表皮条用于GUS染色。我们比较了来自表皮条或小G蛋白ROP7和/或RopGEF4的叶片的GUS染色图像，其是在保卫细胞中特异性表达的基因，并且发现提供了表皮条带的GUS染色显示在叶肉和保卫细胞中表达的基因的保卫细胞表达的良好方法。该方案适用于在拟南芥保卫细胞中表达的任何基因，或表皮条可以容易地从叶上剥离的其它植物。
【背景】气孔运动调节植物和环境之间的气体交换，因此，重要的是揭示气孔的开启或关闭的机制。确定基因的保卫细胞表达对于研究其在气孔运动中的作用至关重要。鉴定基因在保卫细胞中的表达有几种方法。一种方法是通过RT-PCR（Jeon等人，2008; Takimiya等人，2013）检查保卫细胞中基因的RNA表达。为此，需要分离叶肉和保卫细胞的原生质体。另一种方法是检查表达由基因天然启动子驱动的GUS的转基因植物的保卫细胞中的GUS ...
|
|
|
| Direct Visualization and Quantification of the Actin Nucleation and Elongation Events in vitro by TIRF Microscopy
|
|
Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy is a powerful tool for visualizing the dynamics of actin filaments at single-filament resolution in vitro. Thanks to the development of various fluorescent probes, we can easily monitor all kinds of events associated with actin dynamics, including nucleation, elongation, bundling, fragmentation and monomer dissociation. Here we present a detailed protocol regarding the visualization and quantification of actin nucleation and filament elongation events by TIRF microscopy in vitro, which is based on the methods previously reported (Liu et al., 2015; Yang et al., 2011).
[摘要] 全内反射荧光（TIRF）显微镜是用于在体外单丝分辨率下可视化肌动蛋白丝的动力学的强大工具。由于各种荧光探针的发展，我们可以轻松监测与肌动蛋白动力学相关的各种事件，包括成核，伸长，捆扎，碎裂和单体解离。在这里，我们提供了一个关于通过TIRF显微镜在体外可视化和定量肌动蛋白成核和细丝伸长事件的详细方案，其基于先前报道的方法（Liu等人， ，2015; Yang等人，2011）。
背景 ...
|
|
|