| Isolation and Quantification of Plant Extracellular Vesicles
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Extracellular vesicles (EVs) play an important role in intercellular communication by transporting proteins and RNA. While plant cells secrete EVs, they have only recently been isolated and questions regarding their biogenesis, release, uptake and function remain unanswered. Here, we present a detailed protocol for isolating EVs from the apoplastic wash of Arabidopsis thaliana leaves. The isolated EVs can be quantified using a fluorometric dye to assess total membrane content.
[摘要] 细胞外囊泡（EVs）通过传递蛋白质和RNA在细胞间通讯中发挥重要作用。 虽然植物细胞分泌电动汽车，但是它们最近才被孤立，并且关于它们的生物发生，释放，摄取和功能的问题仍然没有得到回答。 在这里，我们提出了一个详细的方案，用于从拟南芥叶片的脱水洗涤中分离EV。 可以使用荧光染料定量分离的EV，以评估总膜含量。
【背景】细胞外囊泡（EVs）是介导蛋白质，脂质和遗传物质的细胞与细胞转移的膜结合结构。由于哺乳动物EVs转运RNA和调节免疫反应的能力，对哺乳动物EV的兴趣已经增长。哺乳动物EV通常被分离用于从培养细胞的培养基中研究，以及生物流体的增长列表（Colombo等，2014）。植物电动车也被认为在免疫反应中起作用，但比较缺乏（An et al。，2007; Davis et al。，2016）。这在很大程度上归因于没有孤立的方法。
虽然植物EVs自1967年以来一直被观察到，使用透射电子显微镜，但直到2009年才开发出分离方法（Halperin和Jensen，1967）。 ...
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| Enriching Acidophilic Fe(II)-oxidizing Bacteria in No-flow, Fed-batch Systems
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Author:
Date:
2017-02-05
[Abstract] Low-pH microbial Fe(II) oxidation occurs naturally in some Fe(II)-rich acid mine drainage (AMD) ecosystems across so-called terraced iron formations. Indigenous acidophilic Fe(II)-oxidizing bacterial communities can be incorporated into both passive and active treatments to remove Fe from the AMD solution. Here, we present a protocol of enriching acidophilic Fe(II)-oxidizing bacteria in no-flow, fed-batch systems. Mixed cultures of naturally occurring microbes are enriched from the fresh surface sediments at AMD sites using a chemo-static bioreactor (Eppendorf BioFlo®/Celligen® 115 Fermentor) with respect to constant stirring speed, temperature, pH and unlimited dissolved oxygen. Ferrous sulfate is discontinuously added to the reactor as the primary substrate to ...
[摘要] 低pH微生物Fe（II）氧化在一些富含Fe（II）的酸性矿井排水（AMD）生态系统中自然发生在所谓的梯田铁层上。土着嗜酸性Fe（II） - 氧化细菌群落可纳入被动和主动处理以从AMD溶液中除去Fe。在这里，我们提出了在无流量，补料分批系统中富含嗜酸性Fe（II） - 氧化细菌的方案。天然存在的微生物的混合培养物使用化学静态生物反应器（Eppendorf BioFlo / Celligen 115发酵罐）从AMD位点的新鲜表面沉积物富集，相对于常数搅拌速度，温度，pH和无限溶解氧。将硫酸亚铁不连续地加入到反应器中作为主要底物，以富集嗜酸性Fe（II） - 氧化细菌。成功和有效地富集嗜酸性Fe（II） - 氧化细菌有助于将这种生物地球化学过程用于AMD治疗系统。
背景 低pH微生物Fe（II）氧化可以通过增强梯田铁地层的发展而被纳入到AMD被动处理系统中（DeSa等人，2010; Brown等人 ，2011; Larson等人，2014a和2014b）。对于非常难治疗的AMD（非常低的pH，非常高浓度的Fe（II）和相关金属），通过富含嗜酸性Fe（II）氧化细菌群落需要主动治疗生物反应器。这个过程可以有效地改变高酸度，高金属排放到中等酸度（仍然很低的pH），低金属排放（Sheng等人，2016）。
＆nbsp;嗜酸性好氧Fe（II）氧化剂酸性硫杆菌属，钩端螺旋体属和黑曲霉属Ferrovum ...
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| Sucrose Preference Test to Measure Stress-induced Anhedonia
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Author:
Date:
2016-06-05
[Abstract] The 2-bottle choice procedure for assessing sucrose preference is a useful test to investigate anhedonia (i.e., inability to feel pleasure) in laboratory rodents, particularly in stress-based models of depression. The 2-bottle choice procedure allows for a comparison between behavioral preference for sucrose solution in drinking water compared to water only. Preference is measured by volume and/or weight of liquid consumed daily, which is then converted to a percent preference compared to a water only baseline period. Sucrose preference is attenuated by a diversity of chronic stressors, including chronic mild and unpredictable stress (Willner et al., 1992; Willner, 1997; Pothion et al., 2004) and social defeat stress (Krishnan et al., 2007). It may also ...
[摘要] 用于评估蔗糖偏爱的2瓶选择程序是对实验室啮齿动物（特别是基于压力的抑郁症模型）中调查麻醉（即不能感觉到快感）的有用测试。 2瓶选择程序允许比较饮用水中蔗糖溶液与仅水相比的行为偏好。偏好是通过每天消耗的液体的体积和/或重量来测量的，然后将其与仅基准水平相比转化为偏好百分比。蔗糖偏好由多种慢性压力因子减弱，包括慢性轻度和不可预测的压力（Willner等，1992; Willner，1997; Pothion等，2004）和社会失败压力（Krishnan等，2007）。在药物成瘾的小鼠模型中也可能会受到干扰，因为在药物依赖个体中蔗糖的偏好被改变（Kampov-Polevoy等，1997; Bogucka-Bonikowska等，2002; Janowsky等，2003）。应激和药物诱导的蔗糖偏好改变可能源于奖励途径中的适应不良，其由从腹侧被盖区域延伸到伏隔核（NAc）的多巴胺能神经元组成。实际上，NAc中的环AMP反应元件结合蛋白（CREB）活性的改变成为蔗糖的优先选择（Barrot等，2002）。另外，NAc中的转录因子ΔFosB（Wallace等人，2008），但不是背海马（Eagle et al。，2015），调节了天然的回报，如蔗糖消耗。因此，以下描述的蔗糖偏好测试提供了一个经过验证的模型，用于评估特异性脑区和电路的脱落和功能。
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