| Biochemical Isolation of Myonuclei from Mouse Skeletal Muscle Tissue
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Skeletal muscle provides the contractile force necessary for movement, swallowing, and breathing and, consequently, is necessary for survival. Skeletal muscle cells are unique in that they are extremely large cells containing thousands of nuclei. These nuclei must all work in concert to maintain skeletal muscle function and thereby maintain life. The nucleus is a major site of signaling integration and gene expression regulation. However, examining nuclear processes in skeletal muscle can be difficult because myonuclei are challenging to isolate. We optimized a protocol to purify myonuclei from whole muscle tissue using ultracentrifugation over a discontinuous sucrose gradient to separate the nuclear fraction. We used these purified nuclei for downstream applications including flow ...
[摘要] 骨骼肌提供运动，吞咽和呼吸所需的收缩力，因此是生存所必需的。骨骼肌细胞是独特的，因为它们是含有数千个核的极大细胞。这些细胞核必须协调一致才能维持骨骼肌功能，从而维持生命。细胞核是信号整合和基因表达调控的主要部位。然而，检查骨骼肌中的核过程可能是困难的，因为肌核难以分离。我们优化了一个协议，从整个肌肉组织使用超速离心蔗糖梯度来分离核分数的纯化肌细胞。我们将这些纯化的细胞核用于下游应用，包括流式细胞术和质谱。我们使用这种方法来比较年轻和老鼠后肢肌肉的肌细胞蛋白质组（Cutler等人，2017）。这个协议可能适用于分离myonuclei的各种下游分析，如流式细胞仪，显微镜，蛋白质印迹和蛋白质组学。
【背景】为了生存，必须保持适当的骨骼肌功能。这种维持的一个组成部分是根据细胞需要和环境线索调整基因表达。调节基因表达的核过程是调节细胞组成和行为的关键组成部分。然而，由于四个技术限制，涉及这些过程的肌细胞蛋白难以研究。首先，骨骼肌是致密的，紧密地填满了组织中超过60％的蛋白质的收缩性蛋白质（Deshmukh等人，2015; Cutler等人）。 ...
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| Microvesicle Isolation from Rat Brain Extract Treated Human Mesenchymal Stem Cells
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Microvesicle (MVs) are submicron-sized membranous vesicles that are either actively released from cells via secretory compartments or shed from cell surface membranes. MVs are generated by many cell types and serve as vehicles that transfer biological information (e.g., protein, mRNA, and miRNA) to distant cells, thereby affecting their gene expression, proliferation, differentiation, and function. Although their physiological functions are not clearly defined, recent studies have shown their therapeutic potential for tissue repair and regeneration. While MVs can be isolated readily from mesenchymal stem cells (MSCs) and other cell types from various sources, the yield of MVs under conventional culture condition in vitro is one of the limiting factors for both the in ...
[摘要] 微囊泡（MV）是亚微米尺寸的膜泡囊，其通过分泌室从细胞中积极释放或从细胞表面膜脱落。 MV由许多细胞类型产生并且用作将生物信息（例如，蛋白质，mRNA和miRNA）转移到远端细胞的载体，从而影响其基因表达，增殖，分化和功能。 虽然他们的生理功能没有明确定义，但最近的研究已经显示出其组织修复和再生的治疗潜力。 虽然MV可以从间充质干细胞（MSC）和来自各种来源的其他细胞类型容易地分离，但在体外常规培养条件下MV的产量是限制因素之一， 功能研究以及体外分析分析。 在这里，我们提供了一个通过大鼠脑提取物预处理MSC增加微泡产量的方案。
【背景】通过直接重编程或利用间充质干细胞进行细胞替代治疗来产生神经干细胞或神经细胞是神经变性疾病的潜在选择（Adib等人，2015）。最近的研究已经证明，来自MSC的微泡代表了增强组织再生，例如神经元再生，免疫调节，脑损伤中的血管发生的其他细胞替代方法的新颖且安全的替代方案（Kim等人，2013） ; Porro等，，2015; Lee等人，2016）。对受损组织外源信号如何影响微泡数量和组成的了解甚少。 MSCs的功能分泌物的含量和数量可以根据微环境的显着变化（Qu等人，2007）。例如，已知缺血性脑提取物或缺氧诱导合成有益于组织再生过程的许多细胞因子和生长因子（Chen等，2007; Shin et ...
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| Isolation of Exosomes from Semen for in vitro Uptake and HIV-1 Infection Assays
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] Exosomes are membranous extracellular nanovesicles of endocytic origin. Exosomes are known to carry host and pathogen-derived genomic, proteomic, lipidomic cargos and other extraneous molecules. Exosomes are secreted by diverse cell types into the extracellular milieu and are subsequently internalized by recipient neighboring or distal cells. Upon internalization, exosomes condition recipient cells by donating their cargos and/or activating various signal transduction pathways, consequently regulating physiological and pathophysiological processes. Exosomes facilitate intercellular communication, modulate cellular phenotype, and regulate microbial pathogenesis. We have previously shown that semen exosomes (SE) inhibit HIV-1 replication in various cell types. Here, we describe detailed ...
[摘要] 外来体是内膜起源的膜性胞外纳米囊。 已知外来载体携带宿主和病原体衍生的基因组，蛋白质组，脂质体载体和其他外来分子。 外来体由不同细胞类型分泌到细胞外环境中，随后被受体相邻细胞或远端细胞内化。 在内化后，外来体通过捐赠其载体和或激活各种信号转导途径来调节受体细胞，从而调节生理和病理生理过程。 外来体促进细胞间通讯，调节细胞表型和调节微生物发病机制。 我们以前表明精液外来体（SE）抑制各种细胞类型的HIV-1复制。 在这里，我们描述特征SE的详细协议。 该方案可以适应或修改，并用于评估感兴趣的其他细胞外小泡。
外来体是由许多细胞类型的晚期内体室内的内体膜向内发生的结果而引起的膜状纳米囊（Simons and Raposo，2009）。外来体被许多细胞类型（Iglesias等人，2012）释放到细胞外环境中，并且被发现在包括血液在内的生物流体中（Kaur等人，2014）尿（Liem等人，2013）唾液（Madison等人，2015）和母乳（Madison等人，2014; Naslund ，2014）。人类精液含有由包括前列腺分泌腺泡细胞在内的男性生殖道组织产生的纳米囊泡的异质群体（Madison等人，2014; Madison等人，2015） （Sahlen等人，2002）和附睾上皮细胞（Frenette等人，2010）以及vasa感染，睾丸和囊泡腺细胞（ ...
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