|
Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Diatoms are an ecologically important group of eukaryotic microalgae with properties that make them attractive for biotechnological applications such as biofuels, foods, cosmetics and pharmaceuticals. Phaeodactylum tricornutum is a model diatom with defined culture conditions, but routine genetic manipulations are hindered by a lack of simple and robust genetic tools. One obstacle to efficient engineering of P. tricornutum is that the current selection methods for P. tricornutum transformants depend on the use of a limited number of antibiotic resistance genes. An alternative and more cost-effective selection method would be to generate auxotrophic strains of P. tricornutum by knocking out key genes involved in amino acid biosynthesis, and using ...
[摘要] 硅藻是一种具有重要生态意义的真核微藻类，其特性使其对生物燃料，食品，化妆品和药品等生物技术应用具有吸引力。 Phaeodactylum tricornutum 是具有确定培养条件的模型硅藻，但缺乏简单而强大的遗传工具阻碍了常规遗传操作。有效设计 P的一个障碍。 tricornutum 是 P的当前选择方法。 tricornutum 转化体依赖于使用有限数量的抗生素抗性基因。另一种更具成本效益的选择方法是产生 P的营养缺陷型菌株。通过敲除参与氨基酸生物合成的关键基因，并使用基于质粒的生物合成基因拷贝作为选择标记，使三角酵母。以前关于 P基因敲除的研究。 tricornutum 使用biolistic转换将CRISPR-Cas9系统传递到 P.藻。非复制质粒的生物射弹转化可导致对 P的不期望的损伤。由于转化的DNA随机整合到基因组中，tricornutum 。随后固化编辑的细胞以防止Cas9的长期过表达是非常困难的，因为目前没有方法来切除整合的质粒。该协议采用新方法将Cas9或TevCas9系统传送到 P. tricornutum 通过来自细菌供体细胞的质粒的缀合。该过程涉及：1）设计和插入靶向 P的guideRNA。将tricornutum 尿素酶基因导入TevCas9表达质粒，该质粒也编码转移的接合起点，2）将该质粒安装在含有含有接合机制的质粒（pTA-Mob）的大肠杆菌中， ...
|
|
Author:
Date:
2016-04-20
[Abstract] Bacterial chemotaxis is a motility-based response that biases cell movement toward beneficial molecules, called attractants, and away from harmful molecules, also known as repellents. Since the species of the genus Pseudomonas are characterized by a metabolic versatility, these bacteria have developed chemotactic behaviors towards a wide range of different compounds. The specificity of a chemotactic response is determined by the chemoreceptor, which is at the beginning of the signaling cascade and which receives the signal input. The basic elements of a typical chemoreceptor are the periplasmic ligand binding domain (LBD), responsible for sensing environmental stimuli, and the cytosolic methyl-accepting (MA) domain, that interacts with other components of the cellular signaling cascade. Escherichia ...
[摘要] 细菌趋化性是基于运动性的反应，其将细胞运动偏向有益分子，称为引诱剂，并远离有害分子，也称为驱避剂。由于假单胞菌属的种属的特征在于代谢多样性，这些细菌已经对宽范围的不同化合物产生趋化行为。趋化反应的特异性由化学感受器确定，化学感受器处于信号级联的开始并且接受信号输入。典型的化学感受器的基本元件是负责感测环境刺激的周质配体结合结构域（LBD）和与细胞信号传导级联的其它组分相互作用的细胞溶质甲基接受（MA）结构域。大肠杆菌（大肠杆菌）是趋化性研究中的传统模型，具有5个良好表征的化学感受器。然而，基因组序列分析已经揭示许多其他细菌具有更多的化学感受器，其中一些具有部分重叠的信号谱。这种高数目的化学感受器通过分析单个化学感受器突变体使他们的研究变得复杂。我们已经寻求化学受体表征的替代策略，其对应于由所研究的化学受体的LBD和E的MA结构域组成的嵌合受体的产生。大肠杆菌受体（Tar）。然后将嵌合体引入E的无化学感受器的突变体。并且所得菌株的趋化性完全是由于该嵌合受体的作用。在本公开中，我们描述了使用定量毛细管和梯度板测定来研究假单胞菌趋化性以及E。含有嵌合受体的大肠杆菌菌株。
|