{{'Search' | translate}}
 

NuncTM Cell Culture/Petri Dishes

Nunc 细胞培养/培养皿

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: 153066
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Hair Follicle Stem Cell Isolation and Expansion
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract]  Stem cells are widely used for numerous clinical applications including limbal stem cell deficiency. Stem cell derived from the bulge region of the hair follicle have the ability to differentiate into a variety of cell types including interfollicular epidermis, hair follicle structures, sebaceous glands and corneal epithelial cells when provided the appropriate cues. Hair follicle stem cells are being studied as a valuable source of autologous stem cells to treat disease. The protocol described below details the isolation and expansion of these cells for eventual clinical application. We used a dual-reporter mouse model to visualize both isolation and eventual differentiation of these cells in a limbal stem cell-deficient mouse model. [摘要]  干细胞被广泛用于许多临床应用,包括角膜缘干细胞缺陷。 当提供适当的提示时,源自毛囊凸出区域的干细胞具有分化成多种细胞类型的能力,包括滤泡间表皮,毛囊结构,皮脂腺和角膜上皮细胞。 正在研究毛囊干细胞作为自体干细胞治疗疾病的宝贵来源。 下面描述的方案详细描述了这些细胞的最终临床应用的分离和扩增。 我们使用双报告小鼠模型来观察这些细胞在角膜缘干细胞缺陷小鼠模型中的分离和最终分化。

【背景】干细胞被广泛用于多种翻译和临床应用。一种这样的临床应用是用于治疗角膜缘干细胞缺陷(LSCD)。当角膜缘干细胞群存在功能障碍或丧失时,LSCD发生,这对于由于先天性或获得性病理而维持健康的眼表非常重要。 LSCD的主要治疗策略是从患者健康眼睛的角膜缘活检组织培养自体上皮细胞片(Pellegrini等人,1997; Shortt等人,2007) 。这种策略的局限性在于它只适用于患有单侧LSCD的患者。那些有双侧LSCD的患者必须依靠免疫相关活体供体或尸体组织的同种异体角膜缘活检。由于全身性免疫抑制治疗的需要和供体组织的有限可用性,治疗成功率降低。一些研究小组一直在研究使用培养的口腔粘膜细胞治疗LSCD并取得了一些成功。然而,这些细胞通常不能表达角膜上皮分化标记角蛋白12(Inatomi等,2006),并且经常导致外周血管新生的发展(Nakamura等人, ,2004; ...

Dual-sided Voltage-sensitive Dye Imaging of Leech Ganglia
Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract]  In this protocol, we introduce an effective method for voltage-sensitive dye (VSD) loading and imaging of leech ganglia as used in Tomina and Wagenaar (2017). Dissection and dye loading procedures are the most critical steps toward successful whole-ganglion VSD imaging. The former entails the removal of the sheath that covers neurons in the segmental ganglion of the leech, which is required for successful dye loading. The latter entails gently flowing a new generation VSD, VF2.1(OMe).H, onto both sides of the ganglion simultaneously using a pair of peristaltic pumps. We expect the described techniques to translate broadly to wide-field VSD imaging in other thin and relatively transparent nervous systems. [摘要]  在这个协议中,我们介绍了一种有效的方法,用于Tomina和Wagenaar(2017)中使用的电压敏感染料(VSD)加载和水蛭神经节成像。 解剖和染料加载程序是成功完成全神经节VSD成像的关键步骤。 前者需要去除覆盖水蛭节段神经节神经元的鞘,这是成功染料加载所需的。 后者需要使用一对蠕动泵同时轻柔地将新一代VSD VF2.1(OMe).H流入神经节的两侧。 我们期望所描述的技术广泛地转化为其他薄且相对透明的神经系统中的宽视场VSD成像。

【背景】双面显微镜是一种宽视野荧光成像系统,由一对精确对准的显微镜组成,用于观察来自对面的神经元制剂并且一次显示不同的焦平面(Tomina and Wagenaar,2017)。通过将该光学系统与新一代电压敏感染料(VSD),VoltageFluor(Miller等人,2012; Woodford等人,2015),荧光可以同时从不同深度的神经元捕获编码具有高保真度膜电压的信号。我们将这种泛神经元记录系统应用于药用水蛭的神经系统,我们利用电生理学方法诱发虚构行为并定量控制可识别神经元的膜电位(Tomina and ...

Fluorescent Measurement of Synaptic Activity Using FM Dyes in Dissociated Hippocampal Cultured Neurons
Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract]  Release and recycling of synaptic vesicles are essential for neurotransmission and synaptic plasticity. To gain mechanistic understanding of these processes, direct measurements of vesicle release and retrieval is indispensable. Styryl dyes like FM1-43 and FM4-64 have been widely used for this purpose and their loading and unloading are reliable measurements for synaptic vesicle release and retrieval in cultured neurons. This protocol describes in detail the procedure of using styryl dyes to label and measure synaptic vesicle uptake and release in cultured rat hippocampal neurons. We also include a brief description of hippocampal culture. In the end, we briefly discuss the commonality and difference among FM dye, pH-sensitive fluorescent proteins and quantum dots in terms of measuring ... [摘要]  突触小泡的释放和再循环对于神经传递和突触可塑性是至关重要的。 为了获得对这些过程的机械理解,直接测量囊泡释放和回收是必不可少的。 苯乙烯基染料如FM1-43和FM4-64已被广泛用于此目的,其装载和卸载是可靠的测量突触小泡释放和恢复培养的神经元。 该协议详细描述了使用苯乙烯基染料来标记和测量培养的大鼠海马神经元中的突触小泡摄取和释放的程序。 我们还包括对海马文化的简要描述。 最后,我们简要讨论FM染料,pH敏感荧光蛋白和量子点在测量突触小泡行为方面的共性和差异。
【背景】突触小泡是神经传递不可或缺的,因为它们是化学突触中负责神经递质释放的唯一细胞器。它们的数量,释放概率,融合动力学和再循环路线定义了突触传递和神经元交流。已经开发了多种用于探测突触囊泡的工具,包括突触后神经元的电生理学记录,膜运输的电容测量,可氧化的发射体的电流分析,固定突触的电子显微镜成像以及活神经元中的囊泡标记的荧光成像。在所有现有的方法中,最后一个是不仅产生关于个体突触的空间和时间信息,而且提供高吞吐量(即,来自不同神经元的单个突触的更多数据点)的唯一方法。已经开发了基于不同定向和报告机制的各种荧光探针。二十多年前发明的苯乙烯基染料(即FM染料,包括FM1-43,FM4-64,FM5-95)仍然是一种可靠而方便的工具。由于其对脂质膜的中等亲和力及其对脂质敏感的排放,可以容易地装载到再循环的突触囊泡中并且当这些囊泡被胞吐出时释放。使用更敏感的光电探测器如EMCCD,FM染料可以报告单个囊泡释放事件。在这里,我们提供了一个相对完整的基于FM的啮齿动物海马神经元原代培养的突触小泡释放成像的描述。此外,我们还讨论了FM染料和其他荧光泡标签的共性和区别。 ...

Comments