| Isolation of Keratan Sulfate Disaccharide-branched Chondroitin Sulfate E from Mactra chinensis
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] Glycosaminoglycans (GAGs) including chondroitin sulfate (CS), dermatan sulfate (DS), heparin (HP), heparan sulfate (HS) and keratan sulfate (KS) are linear, sulfated repeating disaccharide sequences containing hexosamine and uronic acid (or galactose in the case of KS). Recently, a keratan sulfate (KS) disaccharide [GlcNAc6S(β1-3)Galactose(β1-]-branched CS-E was identified from the clam species M. chinensis. Here, we report the isolation protocol for KS-branched CS from M. chinensis.
[摘要] 包括硫酸软骨素（CS），硫酸皮肤素（DS），肝素（HP），硫酸乙酰肝素（HS）和硫酸角质素（KS）的糖胺聚糖（GAGs）是含有己糖胺和糖醛酸（或半乳糖 KS案）。 最近，从蛤蜊种群中鉴定了硫酸角质素（KS）二糖[GlcNAc6S（β1-3）半乳糖（β1 - ] - 支链的CS-E），这里我们报告了分离方案 用于来自中华猕猴桃的KS分枝CS。
【背景】在组织中发现GAG作为蛋白多糖（PG）糖缀合物的聚糖部分。 CS是由N，N-乙酰基-D-半乳糖胺（GalNAc）和葡萄糖醛酸（GlcA）的线性，硫酸化重复二糖序列组成的GAG型。另一种GAG类型的DS通过葡萄糖醛酸C5-差向异构酶对CS的作用进行生物合成，将其GlcA转化为CS差向异构体，艾杜糖醛酸（IdoA）。其他GAG类型HS和HEP由N，N-乙酰基-D-氨基葡糖（GlcNAc）和GlcA / IdoA的硫酸化重复二糖序列组成。 KS由GlcNAc和半乳糖的硫酸化重复二糖序列组成。其中，CS的结构变化，如硫酸化模式和岩藻糖基化，取决于物种和组织的来源。例如，具有结构[-4] GlcA（β1-3）GalNAc4S（β1-）（其中S表示磺酸盐残基）的A-单元是在哺乳动物或鸡气管软骨CS中发现的主要二糖，而C-具有结构[-4] ...
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| Phos-tag Immunoblot Analysis for Detecting IRF5 Phosphorylation
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] While the activation of the transcription factor interferon regulatory factor 5 (IRF5) is critical for the induction of innate immune responses, it also contributes to the pathogenesis of the autoimmune disease systemic lupus erythematosus (SLE). IRF5 phosphorylation is a hallmark of its activation in the Toll-like receptor (TLR) pathway, where active IRF5 induces type I interferon and proinflammatory cytokine genes. By using the phosphate-binding molecule Phos-tag, without either radioisotopes or phospho-specific antibodies, the protocol described here enables detection of the phosphorylation of both human and murine IRF5, as well as that of other proteins.
[摘要] 虽然转录因子干扰素调节因子5（IRF5）的激活对于诱导先天免疫应答至关重要，但也有助于自身免疫疾病系统性红斑狼疮（SLE）的发病机制。 IRF5磷酸化是其在Toll样受体（TLR）途径中的活化的标志，其中活性IRF5诱导I型干扰素和促炎细胞因子基因。通过使用不含放射性同位素或磷酸特异性抗体的磷酸结合分子磷酸标签，本文所述的方案可以检测人和鼠IRF5以及其他蛋白质的磷酸化。
背景 在TLR-MyD88途径中，IRF5通过翻译后修饰如泛素化和磷酸化被激活，然后活性IRF5转位到细胞核中并诱导其靶基因（Takaoka等人，2005; Balkhi ，2008; Tamura等人，2008; Hayden and Ghosh，2014）。关于IRF5在SLE中的激活状态，已经报道了IRF5积累在SLE患者的单核细胞核中（Stone等人，2012）。此外，我们最近在SLE鼠模型中显示，IRF5超激活（例如，升高的磷酸化）导致SLE样疾病的发展（Ban 等人，，2016年）。因此，分析IRF5的激活状态对于研究SLE以及先天免疫应答是重要的。磷酸化是IRF5激活的核心，因为许多研究已经通过定点诱变和/或质谱法揭示了IRF5的功能性磷酸化位点（Barnes等人，2002; Lin et al。等人，2005; ...
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| Measurement of ATP Hydrolytic Activity of Plasma Membrane H+-ATPase from Arabidopsis thaliana Leaves
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Plant plasma membrane H+-ATPase, which is a P-type ATPase, couples ATP hydrolysis to H+ extrusion and thereby generates an electrochemical gradient across the plasma membrane. The proton gradient is necessary for secondary transport, cell elongation, and membrane potential maintenance. Here we describe a protocol for measurement of the ATP hydrolytic activity of the plasma membrane H+-ATPase from Arabidopsis thaliana leaves.
[摘要] 作为P型ATP酶的植物质膜H sup + -ATPase将ATP水解耦合到H + +/- 挤出，从而在质膜上产生电化学梯度。质子梯度对于二次转运，细胞伸长和膜电位维持是必需的。这里我们描述用于测量来自拟南芥叶片的质膜H + -ATPase的ATP水解活性的方案。
关键词： strong> 拟南芥，ATP水解活性，原钒酸盐，P-型ATP酶，血浆膜H + -ATPase
质膜H + -ATPase活性的测定对于阐明其功能和调节机制是重要的。然而，有时难以确定质膜H sup + -ATP酶的ATP水解活性，因为植物细胞含有许多ATP水解酶。该协议是基于Uemura和Yoshida（1986）和Kinoshita等人的出版物开发的。 （1995）。我们使用KNO 3作为V型ATP酶的抑制剂，钼酸铵作为酸性磷酸酶的抑制剂，寡霉素作为F型ATP酶的抑制剂，NaF作为磷酸酶的抑制剂（Shimazaki和Kondo ，1987; Kinoshita等人，1995）。原钒酸盐抑制P型ATP酶，并且因此可以通过评估来自ATP水解的钒酸盐敏感性P 1释放来用于测量质膜H sup + -ATP酶的活性。释放的P 1与钼酸盐反应形成蓝色络合物，然后可以通过测量在750nm的吸收来量化。
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