| Isolation of LYVE-1+ Endothelial Cells from Mouse Embryos
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1, or LYVE-1, is a type 1 integral membrane glycoprotein expressed by lymphatic endothelial cells (LECs). LYVE-1 is commonly used as a biological marker to visually distinguish developing lymphatic vessels from blood endothelial cells (arteries or veins). As our understanding of lymphatic biology is still lacking today, the need to isolate LECs apart from other endothelial cells has taken on greater importance. The following procedure describes a magnetic bead separation procedure for isolating LEC-rich populations of cells from developing mouse embryos.
[摘要] 淋巴管内皮透明质酸受体1或LYVE-1是由淋巴管内皮细胞（LEC）表达的1型整合膜糖蛋白。 LYVE-1通常用作生物标记物，以在视觉上区分发育中的淋巴管与血液内皮细胞（动脉或静脉）。 由于我们今天仍然缺乏对淋巴生物学的理解，因此将LEC与其他内皮细胞分离的必要性变得更加重要。 以下程序描述了用于从发育中的小鼠胚胎中分离富含LEC的细胞群的磁珠分离程序。
【背景】淋巴脉管系统形成二次循环系统，其起到从组织排出细胞外液的作用，允许脂质的转运，并提供免疫细胞运输和运输功能。虽然我们对淋巴系统的理解在过去的几十年中迅速扩大，但与我们对动脉和静脉生物学的了解相比，它仍然缺乏。 LECs鉴定LYVE-1受体表达提供了区分淋巴组织的有用工具，但已知LYVE-1在其他组织中表达，包括肝和脾窦状细胞和胰腺外分泌和朗格汉斯细胞胰岛（Banerji et al。，1999）。由LYVE1基因编码，LYVE-1受体的生物学功能尚未确定，但除了跨内皮细胞的HA转运外，还有人建议参与肿瘤转移（Jackson，2003）。尽管LYVE-1在多种组织中表达，但它仍然是目前用于区分LEC与其他内皮细胞的常用标记物。该方法的目的是使用与LYVE-1抗体偶联的dynabeads以正选择方法从发育中的小鼠胚胎中分离LEC。
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| Leaf Clearing Protocol to Observe Stomata and Other Cells on Leaf Surface
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] In this protocol, leaves are cleared and fixed in an ethanol and acetic acid solution, and mounted in Hoyer’s solution. The cleared leaves are imaged under differential interference contrast (DIC) microscope. This protocol is beneficial for studying stomata, hair cells, and other epidermal cells in plants.
[摘要] 在该方案中，将叶子清除并固定在乙醇和乙酸溶液中，并安装在Hoyer溶液中。 清除的叶片在差分干涉对比（DIC）显微镜下成像。 该方案有利于研究植物中的气孔，毛细胞和其他表皮细胞。
【背景】观察气孔和其他表皮细胞如植物叶片表面毛细胞有多种方法。 传统上，将明亮的指甲油或木胶施加到叶子表面并使其干燥。 将叶片剥离并在显微镜下观察。 或者，将透明胶带施加到叶子上并去除以观察叶表面的印记。 这些传统方法可用于坚固的较厚的叶子，但是图像通常不是最高质量的。 小而脆弱的叶如拟南芥叶需要更先进的方法。 还可以在显微镜下直接观察到新鲜的拟南芥或Brachypodium叶。 然而，叶片中的厚度和颜料在观察气孔和其他表皮细胞方面是困难的。 该协议描述了一种清除叶片，用于可视化包括其他表皮细胞在内的气孔的方法，并且获得了在同行评审期刊中出版的优质图像（Anderson，1954）。
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| Cotyledon Wounding of Arabidopsis Seedlings
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Author:
Date:
2016-01-20
[Abstract] Damage to plant organs through both biotic and abiotic injury is very common in nature. Arabidopsis thaliana 5-day-old (5-do) seedlings represent an excellent system in which to study plant responses to mechanical wounding, both at the site of the damage and in distal unharmed tissues. Seedlings of wild type, transgenic or mutant lines subjected to single or repetitive cotyledon wounding can be used to quantify morphological alterations (e.g., root length, Gasperini et al., 2015), analyze the dynamics of reporter genes in vivo (Larrieu et al., 2015; Gasperini et al., 2015), follow transcriptional changes by quantitative RT-PCR (Acosta et al., 2013; Gasperini et al., 2015) or examine additional aspects of the wound ...
[摘要] 通过生物和非生物损伤对植物器官的损害在自然界中是非常常见的。拟南芥（Arabidopsis thaliana）5天龄（5-do）幼苗代表了一种优异的系统，其中在损伤部位和远端无害组织中研究植物对机械创伤的反应。经受单次或重复子叶伤害的野生型，转基因或突变品系的幼苗可用于定量形态学改变（例如根长度，Gasperini等人，2015），分析体内报道基因的动力学（Larrieu等人，2015; Gasperini等人，2015），遵循定量的转录变化RT-PCR（Acosta等人，2013; Gasperini等人，2015）或通过大量下游程序检查伤口反应的其它方面。在这里我们说明如何快速，可靠地卷绕年轻幼苗的子叶，并显示两个启动子驱动表达的β-葡萄糖醛酸酶（GUS）在整个幼苗和主根根分生组织，单个或重复子叶伤害后的行为，分别。我们描述了可以容易地适应具体实验需要的两个程序。
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