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Date:
2014-07-05
[Abstract] Phagolysosomal trafficking is an important innate defense pathway that clears microbes by delivering them to lysosomes, the degradative compartment of the cell. Mycobacterium tuberculosis (Mtb), the causative agent of tuberculosis, subverts this host defense mechanism by arresting maturation of the phagosome. The ability of Mtb to arrest its delivery to the lysosome can be demonstrated by the prolonged co-localization of bacteria containing phagosomes/vacuole with early phagosomal markers [such as, Ras- related proteins in the brain 5 (Rab5) and Transferrin receptor (TfR)], and a failure to acquire late phagosomal and lysosomal markers (such as Rab7 and LAMP1) (Deretic and Fratti, 1999, Mehra et al., 2013). Here, a protocol is outlined for infection of macrophages with ...
[摘要] 吞噬溶酶体运输是重要的先天防御途径，通过将其递送至溶酶体，即细胞的降解区室来清除微生物。结核病的致病因子结核分枝杆菌（Mtb）通过阻滞吞噬体的成熟来破坏这种宿主防御机制。 Mtb阻止其递送至溶酶体的能力可以通过含有吞噬体/液泡的细菌与早期吞噬体标记物[例如，脑5中的Ras相关蛋白（Rab5）和转铁蛋白受体（TfR） ）]，以及未获得晚期吞噬体和溶酶体标记物（例如Rab7和LAMP1）（Deretic和Fratti，1999，Mehra等人，2013）。在这里，概述了用分枝杆菌物种感染巨噬细胞的方案，所述分枝杆菌物种如致病性Mtb疫苗菌株牛分枝杆菌 - 卡介苗（BCG）和快速分裂的非致病性耻垢分枝杆菌（Msmeg），然后间接免疫荧光显微镜观察宿主液泡标记。此后，通过使用数学工具处理细菌的二值图像来进行分枝杆菌和宿主液泡标记如TfR和LAMP1之间的共定位程度的自动定量。这导致直接在细菌/细菌簇周围的这些宿主标志物的平均荧光强度（MFI）的定量，相对于手动完成时具有增加的灵敏度。通过操纵宿主或病原体，该测定可用于评价细胞内运输的宿主或细菌决定簇。基本方法可以应用于研究其他细菌或颗粒状珠子的运输，尽管感染和吞噬体成熟的动力学将取决于吞噬性货物。数学分析工具可用于许多标准成像分析程序。然而，对于类似分析的任何适应性应由个体用户利用其成像和分析平台来确认。
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