| Evaluation of Cross-presentation in Bone Marrow-derived Dendritic Cells in vitro and Splenic Dendritic Cells ex vivo Using Antigen-coated Beads
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Antigen presentation by MHC class I molecules, also referred to as cross-presentation, elicits cytotoxic immune responses. In particular, dendritic cells (DC) are the most proficient cross-presenting cells, since they have developed unique means to control phagocytic and degradative pathways.
This protocol allows the evaluation of antigen cross-presentation both in vitro (by using bone marrow-derived DC) and ex vivo (by purifying CD8+ DC from spleen after incorporation of particulate antigen) using ovalbumin (OVA)-coupled particles. Cross-presentation efficiency is measured by three different readouts: the B3Z hybridoma T cell line (Karttunen et al., 1992) and stimulation of antigen-specific CD8+ T cells (OT-I) (Kurts et al ...
[摘要] 通过MHC I类分子的抗原呈递，也称为交叉呈递，引起细胞毒性免疫应答。特别地，树突细胞（DC）是最熟练的交叉呈递细胞，因为它们已经开发了控制吞噬和降解途径的独特手段。 <此协议允许在体外（通过使用骨髓衍生的DC）和离体（通过纯化CD8 + ）评价抗原交叉呈递。 （OVA）偶联的颗粒后，来自脾脏的DC/DC结合颗粒抗原）。通过三种不同的读数测量交叉呈递效率：B3Z杂交瘤T细胞系（Karttunen等人，1992）和抗原特异性CD8 + T细胞的刺激OT-I）（Kurts等人，1996），在用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记它们之后分析CD69表达或OT-I增殖的OT-I活化。通过使用这种方法，我们可以最近显示DCs能够在TLR4结合时瞬时增加交叉表达效率（Alloatti等人，2015）。 [背景] 在小鼠中，抗原呈递细胞（APC）能够吸收外源抗原以加工它们，并将源自这些外源抗原的肽加载到主要组织相容性复合体（MHC）I类分子上。肽-MHC I复合物随后被转运到质膜，在那里它们可以呈递到CD8 + T细胞，从而促进T细胞活化，这被称为交叉呈递（Joffre等人， al 。，2012）。在不同的APC中，树突状细胞（DC）在交叉呈递方面表现优异，并且包含表达XCR1标记的不同亚群，其已经显示非常有效地交叉呈递抗原（即CD8 + 来自脾的DC和来自皮肤和肺的CD103 ...
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| EML Erythroid and Neutrophil Differentiation Protocols
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Author:
Date:
2014-06-20
[Abstract] Erythroid-Myeloid-Lymphoid cells (EML) are a multipotent haematopoietic cell line of mouse bone marrow origin capable of long-term maintenance in vitro in the presence of SCF (stem cell factor) (Tsai et al., 1994). The self-renewal capacity of the EML cell line is conferred by the presence of a dominant-negative retinoic acid receptor (RAR) originally delivered by retroviral transduction (Tsai et al., 1994), which arrests cells at an early progenitor stage blocked from normal progression into myeloid differentiation. The presence of the RAR trans-gene does not interfere with erythroid differentiation, and it is possible to capture a low percentage of early erythroid, but not myeloid, committed cells in maintenance cultures (Pina et al., 2012; Ye et al. ...
[摘要] 红细胞 - 髓样淋巴细胞（EML）是能够在SCF（干细胞因子）存在下在体外长期维持的小鼠骨髓来源的多潜能造血细胞系et al。，1994）。 EML细胞系的自我更新能力通过最初通过逆转录病毒转导递送的显性 - 负性视黄酸受体（RAR）的存在（Tsai等人，1994）来赋予，其捕获细胞在阻止从正常进展成骨髓分化的早期祖细胞阶段。 RAR转基因的存在不干扰红细胞分化，并且可能在维持培养中捕获低百分比的早期红细胞而不是骨髓，定型细胞（Pina等人， 2012; Ye等人，2005）。通过使用高剂量的视黄酸（RA），细胞可以被驱动进入粒细胞/嗜中性粒细胞分化，其克服了分化阻断。应当注意，RA的这些药理学剂量与红细胞分化不相容，因此在相同测定中获得稳定的红细胞和骨髓分化是不可行的。实际上，在CFC测定中作为混合谱系评分的集落是未分化和类红细胞的混合物（Tsai et al。，1994）。然而，在如下所述的确定的细胞因子条件下的液体培养中可以获得稳定的单谱系红细胞和嗜中性粒细胞分化。
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