| Olfactory Bulb (OB) Transplants
|
|
Author:
Date:
2016-09-05
[Abstract] Transplantation in mouse brain slices is a powerful tool in order to study axon targeting and migrational events during development. Taking advantage of donors and recipients belonging to different genotypes, this technique allows researchers to assess the contribution of donor and/or recipient tissue by performing various combinations and to study cell-autonomous functions or effects that are influenced by the recipient’s environment (Bastakis, et al., 2015). Here we describe the transplantation procedure on sagittal brain slices containing olfactory bulb (OB). Specifically, we have transplanted the proximal-to-the-cortex part of dorsal OB to the same region on a recipient slice. Transplanted slices can be cultured for up to 3 days before their morphology is disfigured due to ...
[摘要] 小鼠脑切片中的移植是一个强大的工具，以便研究轴突靶向和发展过程中的迁移事件。 利用属于不同基因型的供体和受体，该技术允许研究人员通过进行各种组合来评估供体和/或受体组织的贡献，并研究受受体环境影响的细胞自主功能或效应（Bastakis， em>等人，2015）。 在这里我们描述的矢状大脑切片包含嗅球（OB）的移植程序。 具体来说，我们已经将背侧OB的近端到外皮部分移植到受体切片上的相同区域。 移植的切片可以培养长达3天，之后由于3D中的生长它们的形态被破坏。 这些切片的重新切片允许更详细的免疫组织化学分析。
|
|
|
| Analysis of Enteric Neural Crest Cell Migration Using Heterotopic Grafts of Embryonic Guts
|
|
Author:
Date:
2016-09-05
[Abstract] Hirschsprung disease (HSCR), also named aganglionic megacolon, is a severe congenital malformation characterized by a lack of enteric nervous system (ENS) in the terminal regions of the bowel (Bergeron et al., 2013). As the ENS notably regulates motility in the whole gastrointestinal track, the segment without neurons remains tonically contracted, resulting in functional intestinal obstruction and accumulation of fecal material (megacolon). HSCR occurs when enteric neural progenitors of vagal neural crest origin fail to fully colonize the developing intestines. These “enteric” neural crest cells (ENCCs) have to migrate in a rostro-caudal direction during a fixed temporal window, which is between embryonic day (e) 9.5 and e14.5 in the mouse (Obermayr et al., 2013). ...
[摘要] Hirschsprung病（HSCR），也称为神经节巨结肠，是严重的先天性畸形，其特征在于在肠的末端区域缺乏肠神经系统（ENS）（Bergeron等人，2013）。由于ENS特别调节整个胃肠道的运动性，没有神经元的节段保持紧张收缩，导致功能性肠梗阻和粪便材料（巨结肠）的积累。 HSCR发生在迷走神经嵴来源的肠神经祖细胞不能完全殖民发育的肠道。这些"肠"神经嵴细胞（ENCC）必须在固定的时间窗口内沿着尾 - 尾方向迁移，其在小鼠的胚胎天（e）9.5和e14.5之间（Obermayr等， ，2013）。最近，我们的小组产生了称为荷斯坦的新的HSCR小鼠模型，其中ENCC的迁移受损，因为它们的微环境中胶原VI水平增加（Soret等人，2015）。在这里，我们描述了允许我们演示这种迁移缺陷的细胞自主性的方法。在从先前描述的异位移植方法改造的该系统中（Breau等人，2006），供体组织是e12.5中肠的完全定殖的区段，而宿主组织是e12的非耳部分.5后肠。在宿主组织中ENCC迁移的程度在培养24小时后评估，并且当供体组织具有转基因背景例如允许内源标记的Gata4-RFP（Pilon等人，2008）时极大地促进ENCC在宿主组织中的迁移的程度的ENCCs。根据供体和宿主组织的遗传背景，这种方法可以允许评估细胞自主和非细胞自主缺陷的ENCC迁移。
|
|
|
| A Protocol to Measure the Extent of Cell-to-cell Movement of RNA Viruses in Planta
|
|
Author:
Date:
2014-10-20
[Abstract] Here, we present a simple and rapid protocol to measure the extent of cell-to-cell movement of RNA viruses in planta. To do that, the green fluorescent protein (GFP) gene was incorporated into the genome of Melon necrotic spot virus (MNSV) as a coat protein (CP) fusion protein using the Thosea asigna virus 2A catalytic peptide (TaV 2a) (Serra-Soriano et al., 2014). TaV 2a allows the co-translational cleavage of the fusion protein resulting in the independent expression of both proteins (Kim et al., 2011). Viral infection was initiated by agro-infiltration of Cucumis melo leaves. At 6-7 days post-infiltration, fluorescent infection foci images were taken with a fluorescent stereo microscope and infection areas were measured using FIJI ...
[摘要] 在这里，我们提出一个简单和快速的协议，以测量RNA病毒在植物中的细胞到细胞运动的程度。 为此，将绿色荧光蛋白（GFP）基因作为外壳蛋白（CP）融合蛋白掺入到Melon坏死斑病毒（MNSV）的基因组中，使用Sucha asigna病毒/Ta> 2A催化肽（TaV 2a）（Serra-Soriano等人，2014）。 TaV 2a允许融合蛋白的共翻译切割，导致两种蛋白的独立表达（Kim等人，2011）。 病毒感染通过对黄瓜叶的农杆菌浸润来启动。 在浸润后6-7天，用荧光立体显微镜拍摄荧光感染灶图像，并使用FIJI软件测量感染面积。
|
|
|