| Formalin Murine Model of Pain
|
|
Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Pain research is mostly based on experimental assays that use animal models, which may allow deciphering the physiopathology of this condition and to propel drug discovery. The formalin nociception test is considered one of the most predictive approaches to study acute pain in rodents. This test permits monitoring pain-related responses (i.e., itch) caused by a subcutaneous injection of an inflammatory agent, namely 2.5% formalin solution, in the hind paw. After the injection, two distinct time periods or phases of licking/biting behaviour occur, which are separated by a quiescent period. Importantly, these phases differ in duration and underlying mechanisms. Hence, the initial acute phase (phase I), commonly recorded for 5 min just after formalin administration, reflects acute ...
[摘要] 疼痛研究主要基于使用动物模型的实验分析，这可能允许破译这种病症的病理生理学并推动药物发现。福尔马林伤害感受测试被认为是研究啮齿动物急性疼痛的最有预见性的方法之一。该测试允许监测由后部皮下注射炎症剂，即2.5％福尔马林溶液引起的疼痛相关反应（即，瘙痒）。注射后，发生两个不同的舔/咬行为的时间段或阶段，这些时段或阶段由静止期隔开。重要的是，这些阶段的持续时间和基本机制不同。因此，通常在福尔马林给药后5分钟记录的初始急性期（阶段I）反映了急性外周疼痛，可能是由于通过TRPA1通道直接激活伤害感受器。另一方面，在静止期（5-15分钟）后开始并且通常记录15-30分钟的阶段II是由于正在进行的炎症输入和中枢伤害性敏化。在这里，我们详细描述了用于在小鼠中进行可靠和可重复的福尔马林测试的方案。
【背景】福尔马林试验是允许确定小鼠伤害行为的实验分析。因此，通常在足底后爪（Tjolsen等人，1992）中皮下注射福尔马林后评估小鼠反应（即，舔and和退缩）。该试验最初是在七十年代后期描述的（Dubuisson和Dennis，1977），最初是由一只老鼠或一只猫的前爪背面注射50μl5％福尔马林组成的。此后，福尔马林试验已经被广泛用于评估伤害感受和炎症相关反应，因此根据每项研究的目的进行调整。小鼠和大鼠由于天生的梳理行为而经常使用（即，前爪舔）。因此，注射到啮齿动物后爪中足底表面的2.5％福尔马林（在生理盐水溶液中）通常用于诱导伤害性反应（即，爪，'退缩'和舔）持续45-90分钟（Tjolsen等人，1992）。 ...
|
|
|
| Combination of Fluorescent in situ Hybridization (FISH) and Immunofluorescence Imaging for Detection of Cytokine Expression in Microglia/Macrophage Cells
|
|
Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Microglia and macrophage cells are the primary producers of cytokines in response to neuroinflammatory processes. But these cytokines are also produced by other glial cells, endothelial cells, and neurons. It is essential to identify the cells that produce these cytokines to target their different levels of activation. We used dual RNAscope® fluorescence in situ hybridization (FISH) and immunohistochemistry (IHC) techniques to visualize the mRNA expression pattern of pro- and anti-inflammatory cytokines in microglia/macrophages cells. Using these methods, we can associate one mRNA to specific cell types when combining with different cellular markers by immunofluorescence. Results from RNAscope® probes IL-1β, TNFα, TGFβ, IL-10 or Arg1, showed colocalization ...
[摘要] 小神经胶质细胞和巨噬细胞是响应神经炎症过程的细胞因子的主要生产者。但是这些细胞因子也是由其他神经胶质细胞，内皮细胞和神经元产生的。鉴定产生这些细胞因子的细胞以靶向其不同水平的活化是至关重要的。我们使用双RNAscope荧光原位杂交（FISH）和免疫组织化学（IHC）技术来观察小胶质细胞/巨噬细胞中促炎细胞因子和抗炎细胞因子的mRNA表达模式细胞。使用这些方法，我们可以联合一个mRNA与特定的细胞类型时，通过免疫荧光与不同的细胞标志物结合。来自RNAscope探针的结果IL-1β，TNFα，TGFβ，IL-10或Arg1显示与小胶质细胞/巨噬细胞抗体的共定位。这些靶标探针显示出足够的灵敏度和特异性来检测mRNA表达。新的FISH检测技术结合免疫组化技术将有助于共同确定蛋白质和mRNA的定位，以及提供可靠的mRNA表达水平的量化。
【背景】mRNA原位杂交技术是一种有用的工具，其允许以细胞依赖性方式特异性和选择性标记脑切片中的RNA序列（Grabinski等人，2015 ...
|
|
|
| Obtaining Multi-electrode Array Recordings from Human Induced Pluripotent Stem Cell–Derived Neurons
|
|
Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Neuronal electrical properties are often aberrant in neurological disorders. Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)-derived neurons represent a useful platform for neurological disease modeling, drug discovery and toxicity screening in vitro. Multi-electrode array (MEA) systems offer a non-invasive and label-free platform to record neuronal evoked-responses concurrently from multiple electrodes. To better detect the neural network changes, we used the Axion Maestro MEA platform to assess neuronal activity and bursting behaviors in hiPSC-derived neuronal cultures. Here we describe the detailed protocol for neuronal culture preparation, MEA recording, and data analysis, which we hope will benefit other researchers in the field.
[摘要] 神经元电特性在神经疾病中经常是异常的。 人诱导的多能干细胞（hiPSC）衍生的神经元代表神经疾病建模，药物发现和体外毒性筛选的有用平台。 多电极阵列（MEA）系统提供了一个非侵入性的无标记平台，可同时记录来自多个电极的神经元诱发反应。 为了更好地检测神经网络变化，我们使用了Axion Maestro MEA平台来评估hiPSC衍生的神经元培养物中的神经元活动和爆裂行为。 在这里，我们描述了神经元培养准备，MEA记录和数据分析的详细方案，我们希望这将有益于该领域的其他研究人员。
【背景】人类诱导多能干细胞（hiPSC）技术目前正用于体外模拟神经和精神疾病。最近的研究已经证明，与特定疾病有关的某些细胞表型可以在盘中重现。神经电活动是神经系统功能的本质，代表了正常功能对于情绪，记忆，感觉形态和体内行为至关重要的交流的关键形式。在疾病状况下，电特性可能受到影响，因此了解基于hiPSC的神经疾病模型中的神经元电路连接性，生理学和病理学非常重要。
膜片钳和多电极阵列（MEA）技术是用于评估电生理学活性并由此评估神经元功能的主要技术。尽管膜片钳是研究单个细胞的活性和功能的强大的细胞内方法（Neher等人，1978），MEA平板具有记录细胞外动作电位（或尖峰）的能力，和同一板中数千个不同细胞同时的局部场电位，从而更好地理解网络水平的神经元活动（Hutzler等人，2006; ...
|
|
|