| Isolation and Maintenance of Murine Embryonic Striatal Neurons
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Date:
2018-04-20
[Abstract] Primary cultures of murine striatal neurons are widely used to explore cellular mechanisms in neurobiology, including brain diseases. Here we describe a detailed and standardized protocol to dissect and culture embryonic murine striatal neurons GABA-positive/DARPP-32-positive for 12 days in vitro, when they show good neuronal cell connectivity and the presence of dendritic spines, which reflects the maturation of the network.
[摘要] 小鼠纹状体神经元的原代培养物被广泛用于探索神经生物学中的细胞机制，包括脑部疾病。 在这里，我们描述了一个详细和标准化的协议解剖和文化胚胎小鼠纹状体神经元GABA阳性/ DARPP-32阳性12天体外，当他们显示良好的神经元细胞连接性和存在的树突 刺，反映了网络的成熟。
【背景】纹状体是运动和奖励系统的重要组成部分，纹状体神经元的功能障碍可导致各种神经元疾病，从强迫性行为（Welch et al。，2007）到神经退行性疾病，如在亨廷顿病中观察到的（Reiner等，1988）。因此，一个良好建立的纹状体文化可能是一个很有价值的研究这些和其他条件的模型。成年纹状体中的主要神经元亚型是中型多刺投射神经元（MSNs），其占所有纹状体神经元的约95％并使用抑制性递质γ-氨基丁酸（GABA）。它们具有中等大小的细胞体，复杂的树突状乔木和高密度的树突棘，可同时接受谷氨酸能和多巴胺输入。其余5％的神经元由GABA能神经间神经元组成（Graveland和DiFiglia，1985; ...
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| Infection of Caenorhabditis elegans with Vesicular Stomatitis Virus via Microinjection
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Over the past 15 years, the free-living nematode, Caenorhabditis elegans has become an important model system for exploring eukaryotic innate immunity to bacterial and fungal pathogens. More recently, infection models using either natural or non-natural nematode viruses have also been established in C. elegans. These models offer new opportunities to use the nematode to understand eukaryotic antiviral defense mechanisms. Here we report protocols for the infection of C. elegans with a non-natural viral pathogen, vesicular stomatitis virus (VSV) through microinjection. We also describe how recombinant VSV strains encoding fluorescent or luciferase reporter genes can be used in conjunction with simple fluorescence-, survival-, and luminescence-based assays to ...
[摘要] 在过去的15年中，线虫自由生活已经成为探索真核细菌和真菌病原体真核免疫的重要模型系统。 最近，使用天然或非天然线虫病毒的感染模型也已经在C中建立。线虫。 这些模型提供了使用线虫了解真核抗病毒防御机制的新机会。 在这里，我们报告感染的协议。 线虫与非天然病毒病原体，水泡性口炎病毒（VSV）通过显微注射。 我们还描述了编码荧光或萤光素酶报告基因的重组VSV毒株如何与简单的基于荧光，存活和发光的分析结合使用来鉴定宿主遗传背景，并对病毒感染有不同的易感性。
【背景】由于它的遗传易用性，体积小，文化价廉，透明的身体，自由生活的线虫秀丽隐杆线虫作为模式生物提供了许多优点。此外，C的易感性。线虫对人类多种细菌和真菌病原体的作用使得这种蠕虫成为研究微生物发病机制的有吸引力的系统（Zhang和Hou，2013; Cohen and Troemel，2015）。最近，发现了正义ssRNA奥赛病毒（OV）作为第一种天然的病毒病原体。线虫已经提示使用OV- C。 elegans 模型来定义线虫抗病毒防御机制（Felix等人，2011; Gammon，2017）。这些研究已经证明了线虫抗病毒RNA干扰途径组分如Dicer相关解旋酶1（DRH-1）在限制病毒复制中的明确作用（Ashe等人，2013）。
为了补充OV模型系统，我们最近报道了新一代病毒的产生。使用反义ssRNA水泡性口炎病毒（VSV）（Gammon等人，2017）的线虫模型。用VSV感染野生型（N2）蠕虫是致命的，虽然抗病毒反应（例如突变体，drh-1突变体）突变体缺陷会更快地感染感染（Gammon ...
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| Preparation of Primary Cultures of Embryonic Rat Hippocampal and Cerebrocortical Neurons
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Author:
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2017-09-20
[Abstract] This protocol aims at standardizing the procedure to obtain primary cultures of hippocampal and cerebrocortical neurons for in vitro experiments. Cultures should be prepared from cells isolated during embryonic development when neuronal precursor cells are not yet fully differentiated. This helps increasing the quality and quantity of cells, while offering minimal cell death that often occurs during dissociation of differentiated neurons. Cells plated under the appropriate conditions, either in Petri-dishes or in multi-well plates, will develop and establish synaptic contacts over time since the neuronal culture medium provides the nutrients and trophic factors required for differentiation. In this protocol we describe the methodology for the preparation of both cortical and ...
[摘要] 该方案旨在标准化海马和脑皮质神经元原代培养物的体外实验。 培养物应从胚胎发育期间分离的细胞制备，当神经元前体细胞尚未完全分化时。 这有助于提高细胞的质量和数量，同时提供通常在分化的神经元解离期间发生的最小的细胞死亡。 在合适的条件下，在培养皿或多孔板中铺板的细胞将随着时间的推移而发展和建立突触接触，因为神经元培养基提供分化所需的营养和营养因子。 在这个协议中，我们描述了制备皮质和海马神经元培养物的方法。
【背景】本方案描述了使用补充有NeuroCultTM SM1的Neurobasal培养基（Chen等人，2008）的大鼠海马和脑皮层神经元的原代培养物的制备。 NeuroCultTM SM1的组成基于B27补充剂的制剂（Brewer等，1993），但是前者的混合物被发现提高了神经元培养的质量，部分地通过用全转运蛋白替代载脂蛋白转运蛋白 Chen et al。，2008）。 此外，NeuroCultTM SM1的化学成分在原始出版物中有更详细的描述，可以更好地控制实验条件。 用化学确定的培养基制备的神经元培养物的特征在于存在低百分比的星形胶质细胞。 通过添加有丝分裂5-氟-2'-脱氧尿苷的化学抑制剂可以防止维持更长时间的培养物中星形胶质细胞的增殖以允许神经元分化。
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