| Multilayered Fabrication Assembly Technique to Engineer a Corneal Stromal Equivalent
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Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] Tissue engineering has emerged as a strategy to combat the donor shortage of human corneas for transplantation. Synthetic corneal substitutes are currently unable to support the normal phenotype of human cells and so decellularized animal corneas have been deployed to more closely provide the topographical and biochemical cues to promote cell attachment and function. Although full thickness decellularized corneas can support corneal cells, the cells are slow to populate the scaffold and density declines from the surface. To avoid these problems, this protocol describes the stacking of alternate layers of decellularized porcine corneal sheets and cell-laden collagen hydrogel to produce a corneal construct. The sheets are obtained by cryosectioning porcine corneas, decellularizing them with ...
[摘要] [摘要]组织工程学已成为一种解决人类角膜移植供体短缺的策略。合成的角膜替代物目前不能支持人类细胞的正常表型，因此已经使用脱细胞的动物角膜来更紧密地提供地形和生化线索以促进细胞附着和功能。尽管全厚度的脱细胞角膜可以支持角膜细胞，但这些细胞填充支架的速度很慢，并且密度从表面降低。为了避免这些问题，该协议描述了脱细胞层的交替层的堆叠 猪角膜片和载有细胞的胶原蛋白水凝胶可产生角膜构建体。通过将猪角膜冷冻切片，用去污剂和核酸酶使它们脱细胞，最后进行空气干燥以储存和易于制造，从而获得了薄片。然后将角膜基质细胞封装在I型胶原溶液中，并在这些薄片之间进行浇铸。该协议提出了一种快速的方法，以确保仅使用组织来源的材料即可在整个构建体中获得高细胞度。
图形摘要：
获得角膜基质等效物的主要过程概述
[背景]角膜失明影响着全球数百万人，治疗主要依赖于人类供体角膜的移植（Gain等人，2016）。由于这些捐赠是稀缺的，因此需要基于生物材料的组织工程学的替代方案。正在开发各种各样的策略和材料来工程化角膜组织，一种有前途的方法是使用脱细胞的动物角膜（Fernández- Pérez和Ahearne ...
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| Mimicking Angiogenesis in vitro: Three-dimensional Co-culture of Vascular Endothelial Cells and Perivascular Cells in Collagen Type I Gels
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Author:
Date:
2017-04-20
[Abstract] Angiogenesis defines the process of formation of new vascular structures form existing blood vessels, involved during development, repair processes like wound healing but also linked to pathological changes. During angiogenic processes, endothelial cells build a vascular network and recruit perivascular cells to form mature, stable vessels. Endothelial cells and perivascular cells secret and assemble a vascular basement membrane and interact via close cell-cell contacts. To mimic these processes in vitro we have developed a versatile three-dimensional culture system where perivascular cells (PVC) are co-cultured with human umbilical cord vascular endothelial cells (HUVEC) in a collagen type I gel. This co-culture system can be used to determine biochemical and cellular processes ...
[摘要] 血管发生定义了形成现有血管的新血管结构的形成过程，涉及发育过程中的修复过程，如伤口愈合，还与病理变化有关。 在血管生成过程中，内皮细胞建立血管网络并招募血管周围细胞以形成成熟稳定的血管。 内皮细胞和血管周围细胞秘密并组装血管基底膜，并通过细胞间接触进行相互作用。 为了体外模拟这些过程，我们开发了一种通用的三维培养系统，其中血管周围细胞（PVC）与胶原I型凝胶中的人脐带血管内皮细胞（HUVEC）共培养。 这种共培养系统可用于通过广泛的分析选项来确定新生血管生成事件期间的生物化学和细胞过程。
【背景】内皮细胞和血管周围细胞之间的协调相互作用对于根据给定组织内的局部需要形成稳定的血管网是非常重要的。多个分子组分有助于相互作用，但仍然很少了解。需要各种生长因子来吸引内皮细胞到低氧浓度的位点，并建立新的血管，然后被血管周围细胞覆盖。两种细胞类型相互作用以分泌特定的细胞外基质并稳定新形成的血管。在过去已经建立了多个测定法来分析二维基质胶底物上的血管细胞相互作用和血管样网络形成，但是这些测定在三维细胞内提供关于血管内血管周围细胞相互作用和血管基底膜形成的初始步骤的信息是有限的维度微环境。此外，缺乏适合于培养实验的良好表征的血管周围细胞。
我们以前分离出具有血管周围特征的细胞，因为它们表达周细胞特异性标记，产生和分泌细胞外基质蛋白并在体内刺激血管生成过程（Brachvogel等，2005和2007）。这些细胞用于与人脐静脉内皮细胞建立共培养系统，并研究三维微环境中两种细胞类型相互作用后新生血管发生的关键步骤（Pitzler等，2016; ...
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| In vitro Chondrogenic Hypertrophy Induction of Mesenchymal Stem Cells
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] To investigate underlying mechanism of chondrogenic hypertrophy, we need proper in vitro hypertrophic model of mesenchymal stem cells (MSCs). This protocol describes our defined method for induction of in vitro chondrogenic hypertrophy of human umbilical cord blood-derived MSCs (hUCB-MSCs). By adding thyroid hormone (T3; triiodothyronine) and minimum osteogenic-inducing factors to culture medium, we could induce hypertrophy of hUCB-MSCs in vitro. Hypertrophic induction was validated using immunohistochemical analysis, Western blotting and reverse transcriptase polymerase chain reaction.
[摘要] 为了研究软骨形成性肥大的基础机制，我们需要适当的体外间充质干细胞（MSC）的增生模型。该协议描述了我们定义的诱导人脐带血衍生的MSC（hUCB-MSC）的体外软骨形成性肥大的方法。通过将甲状腺激素（T3;三碘甲状腺原氨酸）和最小成骨诱导因子添加到培养基中，我们可以在体外诱导hUCB-MSCs的增生。使用免疫组织化学分析，Western印迹和逆转录酶聚合酶链反应验证肥大性诱导。
关键词：间充质干细胞，体外软骨形成性肥大，成软骨分化，三碘甲腺原氨酸;
[背景] ...
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