| Isolation of Tumor Cells Based on Their Distance from Blood Vessels
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Differential exposure of tumor cells to microenvironmental cues greatly impacts cell phenotypes, raising a need for position based sorting of tumor cells amenable to multiple OMICs and functional analyses. One such key determinant of tumor heterogeneity in solid tumors is its vasculature. Proximity to blood vessels (BVs) profoundly affects tumor cell phenotypes due to differential availability of oxygen, gradient exposure to blood-borne substances and inputs by angiocrine factors. To unravel the whole spectrum of genes, pathways and phenotypes impacted by BVs and to determine spatial domains of vascular influences, we developed a methodology for sorting tumor cells according to their relative distance from BVs. The procedure exemplified here using glioblastoma (GBM) model is based on ...
[摘要] [摘要 ] 肿瘤细胞的差分暴露于微环境线索大大IM 协议小号细胞表型，提高基于需要位置的肿瘤细胞的分选适合于多个组学和功能分析。实体瘤中肿瘤异质性的此类关键决定因素之一是其脉管系统。邻近血管（的BV）深刻affec TS 肿瘤细胞表型是由于氧气的可利用性不同，对血源性物质的梯度暴露以及血管分泌因子的输入所致。为了揭示受BV影响的基因，通路和表型的整个谱图，并确定血管影响的空间域，我们开发了一种根据肿瘤细胞与BV的相对距离进行分类的方法。此处使用胶质母细胞瘤（GBM）模型示例的程序基于静脉内注射，自由扩散的荧光染料的差异摄取，该染料允许分离位于适合于后续OMIC和功能分析的不同连续微环境中的无基质肿瘤细胞。这种可靠，易于使用，具有成本效益的策略可以扩展到所有实体瘤，以研究脉管系统的影响或缺乏脉管系统的影响。
[背景 ] 在充足的血液供应肿瘤依赖已经提供了一种用于抗血管生成的癌症治疗的理由（Carmeliet和耆那，2000; Vasudev 等人，2013年）。传统上归因于氧气和其他血源性物质的提供，肿瘤脉管系统在肿瘤生物学中的作用最近扩展到包括由分泌的内皮产生的血管分泌因子施加的非灌注依赖性旁分泌输入（Butler 等人，2010； Beck 等人，2011； Lu 等人，2013），以及通过相互Notch信号传导介导的肿瘤-BV直接接触（Cao ...
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| Primary Culture System for Germ Cells from Caenorhabditis elegans Tumorous Germline Mutants
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Date:
2017-08-05
[Abstract] The Caenorhabditis elegans germ line is an important model system for the study of germ stem cells. Wild-type C. elegans germ cells are syncytial and therefore cannot be isolated in in vitro cultures. In contrast, the germ cells from tumorous mutants can be fully cellularized and isolated intact from the mutant animals. Here we describe a detailed protocol for the isolation of germ cells from tumorous mutants that allows the germ cells to be maintained for extended periods in an in vitro primary culture. This protocol has been adapted from Chaudhari et al., 2016.
[摘要] 秀丽隐杆线虫种系是胚芽干细胞研究的重要模型系统。 野生型C。 线虫生殖细胞是合胞体，因此不能在体外培养中分离。 相比之下，来自肿瘤突变体的生殖细胞可以完全被细胞化并从突变动物中完整分离。 在这里，我们描述了从肿瘤突变体中分离生殖细胞的详细方案，其允许生殖细胞在体外原代培养中长时间维持。 该协议已从2016年Chaudhari等人改编。
【背景】秀丽生殖细胞在位于两个性腺臂的远端区域的两个成体干细胞龛中产生（Hansen和Schedl，2013; Kimble和Seidel，2013）。在野生型雌雄同体中，有丝分裂生殖细胞仅限于性腺臂的远端，干细胞生态位。野生型生殖细胞是合胞体，并且包含延伸通过性腺臂中心区域的共同细胞质的开口。 ℃。线虫肿瘤种系突变体在整个性腺中增加了生殖细胞的有丝分裂增殖。我们发现肿瘤种系突变体通常具有完整的细胞生殖细胞，其含有完整的质膜（Chaudhari等人，2016）。这种细胞化允许生殖细胞的分离及其在培养中的维持。该方案描述了分离和维持培养物中肿瘤突变体的生殖细胞的方法学和组织培养基。虽然已经描述了用于C的主要培养物的培养基。 elegans 胚胎和幼虫细胞（Strange等人，2007; Zhang和Kuhn，2013），生殖细胞在这种培养基中不能存活（Chaudhari等人。 ...
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| Evaluation of Caspase-1 Activation and IL-1β Production in A Kainic Acid Microdyalisis Brain Injury Model
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2013-04-20
[Abstract] Intracerebral infusion of kainic acid (KA) by a microdialysis probe induces a focal swelling in the brain-perfused area which promotes inflammation (Compan et al., 2012; Oprica et al., 2003). The microdialysis technique allows the local in vivo perfusion of KA and the simultaneous collection of inflammatory mediators, and other neuroactive substances, released in the injured brain. This protocol also allows the perfusion of different solutions in each cerebral hemisphere at the same time. By perfusing KA in isotonic solution of Krebs-Ringer Bicarbonate (KRB) (280-290 mOsm) in one hippocampus and KA in hypertonic KRB solution (1,400-1,500 mOsm) in the contralateral side, we can evaluate in vivo the efficiency of hypertonic solutions in preventing ...
[摘要] 通过微透析探针脑内输注红藻氨酸（KA）在脑灌注区域诱导局灶性肿胀，这促进炎症（Compan等人，2012; Oprica等人， 。，2003）。微透析技术允许局部的体内灌注KA和同时收集炎性介质和其他神经活性物质，释放在受伤的脑中。该协议还允许在每个大脑半球同时灌注不同的溶液。通过在对侧中在一个海马中的Krebs-Ringer碳酸氢盐（KRB）（280-290mOsm）的等渗溶液中灌注KA和在高渗KRB溶液（1,400-1,500mOsm）中的KA，我们可以在体内评价高渗溶液在KA输注后预防由肿胀引起的炎症的效率。一旦已经诱导炎症反应，就有可能通过微透析探针输入胱天蛋白酶-1的生物素化特异性抑制剂，从而允许检测响应于损伤的IL-1产生的脑区域和细胞（Oprica等人， et al。，2003）。
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