| Image-Based Analysis of Mitochondrial Area and Counting from Adult Mouse Dopaminergic Neurites
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Mitochondria form dynamic cytoplasmic networks which undergo morphological changes in order to adapt to cellular stresses and signals. These changes can include alterations in size and number within a given cell. Analysis of the whole network can be a useful metric to assess overall mitochondrial health, particularly in neurons, which are highly sensitive to mitochondrial dysfunction. Here we describe a method which combines immunofluorescence and computerized image analysis to measure mitochondrial morphology (quantification of number, density, and area) in dopaminergic neurites of mice expressing mitochondrially-targeted eYFP.
[摘要] 线粒体形成动态细胞质网络，其经历形态变化以适应细胞应激和信号。 这些变化可以包括给定单元内的大小和数量的改变。 分析整个网络可以是评估整体线粒体健康的有用指标，特别是在对线粒体功能障碍高度敏感的神经元中。 在这里，我们描述了一种方法，它结合免疫荧光和计算机图像分析，以测量表达线粒体靶向eYFP的小鼠的多巴胺能神经突的线粒体形态（数量，密度和面积的量化）。
【背景】 线粒体是存在于每个复杂生物的基本上所有细胞中的双膜细胞器。它们的主要功能是提供大部分细胞能量作为ATP，但它们也在细胞凋亡，缓冲细胞内Ca 2 + ，活性氧物质产生和膜电位调节中发挥作用（Neupert和Herrmann， 2007; Hamanaka和Chandel，2010; Shutt和McBride，2013）。
这些细胞器通常被描述为单个“豆状”结构，实际上是动态细胞质网络的组成部分。它们可以经历由膜融合和裂变的动态过程调节的主要形态变化，该过程被认为涉及通过称为线粒体自噬的过程消除功能障碍的细胞器。线粒体网络也可以作为对高细胞能量需求的响应而增加（Sheng，2017; Devine和Kittler，2018）。线粒体网络的形态可以根据不同的应激源而改变，并且存在多种可能的形态，即细胞类型，甚至细胞室依赖性（Picard et al。，2013 ...
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| Combinations of Patch-Clamp and Confocal Calcium Imaging in Acutely Isolated Adult Mouse Amygdala Brain Slices
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Calcium imaging is a powerful technique in the study of neuronal physiology, as it avoids the enzyme treatment on neurons and is able to study the neuronal activities in vivo. Using calcium-imaging techniques, we are able to monitor the elevation of calcium in the neuron. Furthermore, we can combine calcium imaging with other methods, like whole-cell patch clamp recordings, to detect a single cell calcium signal in brain slices. In this protocol, we describe a detailed confocal imaging method that is combined with whole-cell patch clamp configuration using brain slices (Du et al., 2017).
[摘要] 钙成像是神经生理学研究中的一项强有力的技术，因为它避免了对神经元的酶处理，并且能够研究体内的神经元活动。 使用钙成像技术，我们能够监测神经元中钙的升高。 此外，我们可以将钙成像与其他方法结合起来，如全细胞膜片钳记录，以检测脑切片中的单细胞钙信号。 在该协议中，我们描述了一种详细的共焦成像方法，该方法与使用脑切片的全细胞膜片钳配置相结合（Du et al。，2017）。
【背景】几十年来，脑切片已成功用于研究突触，神经元和神经回路。许多实验操作已经应用于脑切片模型，例如药物应用，细胞内记录和光学成像。与培养的神经元相比，脑切片保留了神经元回路的许多基本功能特性。钙成像是一种广泛使用的技术，旨在表明分离的细胞和组织的细胞内钙（Ca 2 + ）状态。研究脑组织中的细胞内钙可以深入了解各种生理过程，如细胞增殖，信号转导，突触可塑性和细胞死亡，因为钙浓度在这些功能中起着关键作用（Cameron et al。，2016）。钙指示剂是一种荧光分子，它与Ca 2 + ...
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| A Streamlined Method for the Preparation of Gelatin Embedded Brains and Simplified Organization of Sections for Serial Reconstructions
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Gelatin embedding of whole brains for sectioning is a critical procedure used in neuroscience to ensure all morphological and spatial details are preserved intact. Here, we describe an inexpensive, reproducible and efficient means to embed post-fixed brains ready for sectioning in gelatin within a week’s time. The sections obtained are distortion-free and their fragile internal structures preserved which can be used for serial reconstructions for lesion studies and mapping of viral expression after stereotaxic injections. In addition, the separation of adjacent slices into a series of 3-4 vials facilitates subsequent organization and assembly of serial sections at the mounting step.
[摘要] 整个脑切片明胶嵌入是神经科学中使用的关键程序，以确保所有的形态和空间的细节保存完好。 在这里，我们描述了一个廉价，可重复和有效的方法来嵌入后固定的大脑准备切片明胶一个星期的时间。 获得的部分是无畸变的，它们的脆弱内部结构被保留下来，可用于系列重建病变研究和立体定位注射后的病毒表达图谱。 此外，将相邻切片分离成3-4个小瓶系列便于在安装步骤中对连续切片进行组织和组装。
【背景】行为神经科学的最新进展已经允许将视蛋白和抗体靶向毒素引入特定亚群的神经元和大脑区域。这些研究通常需要全脑切片的可视化用于组织学和形态学分析，以通过用于行为验证的立体定位注射（Aoki等，，2015）或引言定位细胞类型特异性抗体靶向毒素诱导的损伤的病毒递送转基因（Aquili等人，2014）。利用狂犬病病毒（Suzuki等人，2012）对神经元回路进行了详细的绘图，并且使用明胶作为包埋剂实现了连续切片的定位调查，所述包埋剂作为组织内和周围的结构基质。明胶浸渍的脑组织提供了加强的支持精致的内部结构，如海马和脑室空间，这是容易损坏免疫组织化学（IHC）处理和随后安装到幻灯片上。嵌入式脑切片在安装时通常也不会变形，并且可以将相邻切片用于连续重建。
凝胶嵌入和IHC处理后的质量取决于几个程序性的细节，这可能是乏味和耗时的。在先前公开的方案中，明胶向脑和心室空间的适当渗透和渗透需要真空烘箱（Griffioen等，1992）。此外，将大脑嵌入小模具中是具有挑战性的，因为大脑具有漂浮的趋势。另外，在连续重构的IHC处理之后识别和定向相邻切片可能是艰巨的。 ...
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