| H1N1 Virus Production and Infection
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Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] Influenza A virus is a member of orthomyxoviridae family causing wide-spread infections in human respiratory tract. Mouse infection model is widely used in antiviral research and pathogenesis study against influenza A virus. Here, we report a protocol in infected mice with different virus doses and strains to explore how an inhibitor of lysine-specific demethylase (LSD1) impacts disease progression.
[摘要] 甲型流感病毒是正粘病毒科的成员，在人呼吸道中引起广泛的感染。 小鼠感染模型广泛用于抗甲型流感病毒的抗病毒研究和发病机制研究。 在这里，我们报告了受感染小鼠中具有不同病毒剂量和菌株的方案，以探索赖氨酸特异性去甲基化酶（LSD1）的抑制剂如何影响疾病进展。
【背景】甲型流感病毒是正粘病毒科的一员，是一种负义RNA病毒，具有八个分段的单链病毒RNA（vRNA）基因组，编码10种以上的蛋白质。在过去100年中，流感病毒株的爆发经常出现在人群中，包括1918年由H1N1亚型引起的“西班牙流感”，1957年由H2N2引起的“亚洲流感”，1968年由H3N2引起的“香港流感”， “H1N1流感”于1977年发生的“俄罗斯流感”，以及2009年H1N1流行的“猪流感”（Smith et al。>，2009; Lim and Mahmood，2011; Kumar et al。> ，2018年）。季节性甲型流感病毒也在世界范围内传播，容易在人与人之间传播，每年导致全世界300万至500万人住院（Molinari et al。>，2007）。季节性流感感染每年导致290,000-650,000人死亡，主要是年幼儿童，老年人和重症患者（Kumar et al。>，2018）。
流感病毒研究中使用动物模型不仅可以阐明影响疾病结果的病毒和宿主因素，还可以在易感宿主中传播，还可以评估旨在预防或降低流感发病率和死亡率的干预措施（Thangavel和Bouvier，2014）。在本文中，我们使用两种甲型流感病毒，A ...
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| Generation of Human Mesenchymal Stem Cell 3D Spheroids Using Low-binding Plates
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] The 3D culture of human mesenchymal stem cells (hMSCs) represents a more physiological environment than classical 2D culture and has been used to enhance the MSC secretome or extend cell survival after transplantation. Here we describe a simple and affordable method to generate 3D spheroids of hMSCs by seeding them at high density in a low-binding 96-well plate.
Spheroids of hMSCs cultured in low-binding 96-well plates can be used to study the basic biology of the cells and to generate conditioned media or spheroids to be used in transplantation therapeutic approaches. These MSCs or their secretome can be used as a regenerative therapy and for tissue repair across multiple disease areas, including neurodegeneration.
In comparison to other methods (hanging drop, use ...
[摘要] 人间充质干细胞（hMSC）的3D培养代表比经典2D培养更生理的环境，并且已经用于增强MSC分泌组或移植后延长细胞存活。 在这里，我们描述了一种简单且经济实惠的方法，通过在低密度96孔板中高密度接种hMSC来生成三维球状体。
在低结合96孔板中培养的hMSC的球状体可用于研究细胞的基本生物学并产生用于移植治疗方法的条件培养基或球状体。 这些MSC或其分泌蛋白组可用作再生疗法和用于多个疾病区域的组织修复，包括神经变性。
与其他方法（悬滴，使用凝胶或生物材料，磁悬浮，等）相比，此处描述的方法简单且经济实惠，无需使用专用设备，昂贵材料或复杂试剂。
【背景】 间充质干细胞（MSCs）是开发针对中风或肌萎缩侧索硬化等疾病的新型再生疗法的有吸引力的候选者（Chen et al。，2001; Bang et al。，2005; Boido et al。，2014）。它们的多功能性使得技术的优化和标准化对于确保MSC疗法可以提供尽可能多的益处是必不可少的。使MSC的治疗潜力（例如，增强的抗炎介质分泌）最大化的一种可能方式是以3D方式培养它们（Bartosh ...
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| Preparation of Cerebellum Granule Neurons from Mouse or Rat Pups and Evaluation of Clostridial Neurotoxin Activity and Their Inhibitors by Western Blot and Immunohistochemistry
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] Cerebellar Granule Neurons (CGN) from post-natal rodents have been widely used as a model to study neuronal development, physiology and pathology. CGN cultured in vitro maintain the same features displayed in vivo by mature cerebellar granule cells, including the development of a dense neuritic network, neuronal activity, neurotransmitter release and the expression of neuronal protein markers. Moreover, CGN represent a convenient model for the study of Clostridial Neurotoxins (CNT), most notably known as Tetanus and Botulinum neurotoxins, as they abundantly express both CNT receptors and intraneuronal substrates, i.e., Soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor activating protein receptors (SNARE proteins). Here, we describe a protocol for obtaining a highly pure ...
[摘要] 来自产后啮齿动物的小脑颗粒神经元（CGN）已被广泛用作研究神经元发育，生理学和病理学的模型。 CGN体外培养维持成熟小脑颗粒细胞在体内显示的相同特征，包括发育致密的神经炎网络，神经元活动，神经递质释放和神经元的表达 蛋白质标记。 此外，CGN代表了梭菌神经毒素（CNT）研究的便利模型，最着名的是破伤风和肉毒杆菌神经毒素，因为它们大量表达CNT受体和神经元内基质， ie ，可溶性N-乙基马来酰亚胺 - 敏感因子激活蛋白受体（SNARE蛋白）。 在这里，我们描述了从出生后大鼠/小鼠获得高纯度CGN培养物的方案和用CNT中毒的简便方法。 我们还说明了评估CNT活性及其抑制的方便方法。
【背景】梭菌神经毒素（CNT）的大家族由破伤风神经毒素（TeNT）和肉毒杆菌神经毒素（BoNT）的多种变体形成，它们分别是破伤风和肉毒中毒的神经麻痹毒素（Schiavo et al。，2000; Johnson和Montecucco，2008; Rossetto et al。，2014）。 TeNT，七种BoNT血清型（BoNT / A至/ G）及其许多亚型是金属蛋白酶，通过切割SNARE蛋白（可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子激活蛋白受体），三种必需蛋白质来阻断神经递质的释放而引起神经麻痹。控制突触小泡与突触前质膜的融合（Rossetto et al。，2014; ...
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