| Murine Pancreatic Islets Transplantation under the Kidney Capsule
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Type 1 diabetes (T1D) is an autoimmune disease caused by the lack of insulin-producing pancreatic beta cells leading to systemic hyperglycemia. Pancreatic islet transplantation is a valid therapeutic approach to restore insulin loss and to promote adequate glycemic control. Pancreatic islet transplantation in mice is an optimal preclinical model to identify new therapeutic strategies aiming at preventing rejection and optimizing post-transplant immuno-suppressive/-tolerogenic therapies.
Islet transplantation in preclinical animal models can be performed in different sites such the kidney capsule, spleen, bone marrow and pancreas. This protocol describes murine islet transplantation under the kidney capsule. This is a widely accepted procedure for research purposes. Stress ...
[摘要] 1型糖尿病（T1D）是由于缺乏产生胰岛素的胰腺β细胞导致系统性高血糖症而引起的自身免疫性疾病。 胰岛移植是恢复胰岛素损失和促进充分血糖控制的有效治疗方法。 小鼠胰岛移植是一种最佳的临床前模型，用于鉴定旨在预防排斥和优化移植后免疫抑制/抗原治疗的新治疗策略。
临床前动物模型中的胰岛移植可以在不同部位进行，如肾囊，脾脏，骨髓和胰腺。 该协议描述了肾囊下的鼠胰岛移植。 这是一个被广泛接受的研究目的。 动物造成的压力很小，并导致可靠和可重复的结果。
【背景】迄今为止在小动物模型中报道了许多用于胰岛植入的备选位置，并且必须根据要使用的程序的技术优势和实验目的来选择理想的位点。 考虑到肾囊是一种血管外部位，并且它没有免疫保护，肾囊下的胰岛移植仍然是一种低死亡率的手术过程，导致几天内高血糖症逆转。 另外，肾囊下的移植允许组织学研究和胰岛功能的正式证明（Cantarelli和Piemonti，2011; Elisa Cantarelli等人，2013）。
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| Determination of Polyhydroxybutyrate (PHB) Content in Ralstonia eutropha Using Gas Chromatography and Nile Red Staining
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Ralstonia eutropha H16 produces and mobilizes (re-utilizes) intracellular polyhydroxybutyrate (PHB) granules during growth. This protocol describes the visualization of intracellular Nile red stained PHB granules and the quantification of PHB by gas chromatography. Our first method describes how to analyze PHB granules by fluorescence microscopy qualitatively. Our second approach enables the conversion of PHB to volatile hydroxycarboxylic acid methyl esters by acidic methanolysis and their quantification by gas chromatography. Through this method, it is possible to obtain an absolute quantification of PHB, e.g., per cell dry weight.
[摘要] 在生长过程中，富养罗尔斯通氏菌H16产生和动员（重新利用）细胞内聚羟基丁酸酯（PHB）颗粒。 该协议描述了细胞内尼罗红染色的PHB颗粒的可视化和通过气相色谱定量PHB。 我们的第一种方法描述了如何通过荧光显微镜定性分析PHB颗粒。 我们的第二种方法可以通过酸性甲醇分解和气相色谱定量法将PHB转化为挥发性羟基羧酸甲酯。 通过该方法，可以获得PHB的绝对定量，例如，每细胞干重。
【背景】聚羟基脂肪酸酯（PHA），尤其是聚羟基丁酸酯（PHB），是许多原核生物物种中的能量和碳储存化合物，确保细菌在压力条件下存活（Anderson和Dawes，1990;Pötter和Steinbüchel，2006; Jendrossek和Pfeiffer，2014; Bresan， >等。，2016）。这些生物聚合物的工业应用是生物降解塑料的生产（Chen，2009; Riedel等人，2015）和潜在药物成分的研究（Wu，2009; Zonari等人， ，2015; Pacheco et al。，2015; Giretova ...
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| Extraction of Soluble and Insoluble Protein Fractions from Mouse Brains and Spinal Cords
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] The current protocol details the preparation of soluble and insoluble protein lysates from mouse brain or spinal cord samples. In detail, tissue homogenization and sequential protein extraction are described. This procedure yields soluble and insoluble protein extracts that can be further processed in down-stream applications like ELISA or Western blotting.
[摘要] 目前的方案详述了从小鼠脑脊髓样品中制备可溶性和不溶性蛋白质裂解物。 详细地描述了组织匀浆和顺序蛋白质提取。 该方法产生可溶性和不溶性蛋白质提取物，其可以在下游应用中进一步加工，如ELISA或Western印迹法。
【背景】这种简单且可重现的脑组织蛋白分离方案详述了总蛋白匀浆物初始分离成可溶性和不溶性级分。 它也可以应用于其他组织样品，并产生含有亲水性蛋白质的可溶性级分和由更疏水的蛋白质组成的不溶性级分。 在不含洗涤剂的裂解缓冲液中进行初始均化后，除去含有可溶性蛋白质级分的上清液，并且可以使用十二烷基硫酸钠（SDS）作为洗涤剂进一步提取含有不溶性级分的沉淀物，以确保全细胞裂解（参见图1）。 这种方法可以通过降低样品的复杂性来促进低丰度蛋白质的分析。
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图1.描述顺序提取过程的流程图
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