| Electro-fusion of Gametes and Subsequent Culture of Zygotes in Rice
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Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] Electro-fusion system with isolated gametes has been utilized to dissect fertilization-induced events in angiosperms, such as egg activation, zygote development and early embryogenesis, since the female gametophytes of plants are deeply embedded within ovaries. In this protocol, procedures for isolation of rice gametes, electro-fusion of gametes, and culture of the produced zygotes are described.
[摘要] 已经利用具有孤立配子的电融合系统来解剖被子植物中受精诱导的事件，例如卵活化，合子发育和早期胚胎发生，因为植物的雌配子体深深嵌入卵巢内。在该方案中，描述了分离水稻配子，配子电融合和产生的受精卵培养的程序。
背景 被子植物的受精和后续事件，如胚胎发生和胚乳发育，发生在深入嵌入卵母细胞的胚囊中（Nawaschin，1898; Guignard，1899; Russell，1992; Raghavan，2003）。因此，分离的配子已被用于体外受精（IVF）系统，以观察和分析受精和后处理过程（Wang等人，2006年）。用于被子植物的IVF系统包括三种基本微技术的组合：（i）男性和女性配子的分离和选择; （ii）配对对和（iii）单细胞培养物的融合（Kranz，1999）。已经在广泛的植物物种中建立了分离活的配子的程序，包括单子叶植物和双子叶植物（综述于Kranz，1999和Okamoto，2011）。分离的配子可以电融合（Kranz等人，1991; Uchiumi等人，2006和2007）或化学地使用钙（Faure等人，1994; Kranz和Lörz，1994; Khalequzzaman和Haq，2005），聚乙二醇（Sun等，1995; ...
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| Microscopic Observation, Three-dimensional Reconstruction, and Volume Measurements of Sperm Nuclei
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Author:
Date:
2015-04-05
[Abstract] Karyogamy, a migration of the sperm nucleus toward the egg nucleus and their subsequent nuclear fusion, is an important biological event for initiating zygote formation toward early embryogenesis in angiosperms. However, how the male nucleus approaches and fuses with the female nucleus still remains unclear. Recently, time-lapse measurement of nuclear volume during karyogamic events revealed that the sperm nucleus enlarges during contact with the egg nucleus via possible one-directional migration of egg chromatin into sperm nucleus (Ohnishi et al., 2014). Here, we describe the protocol for microscopic observation, three-dimensional reconstruction, and volume measurements of sperm nuclei in rice zygotes/fused gametes, which are produced by an in vitro fertilization system ...
[摘要] 核型，精子核朝向卵核和它们随后的核融合的迁移是引起被子植物中早期胚胎形成的合子形成的重要生物事件。然而，男性核如何接近和融合与女性核仍然不清楚。最近，核染色体事件中核体积的延时测量显示精子核在与卵核接触期间扩大，通过卵染色质可能的一向迁移到精子核中（Ohnishi等人，2014年， ）。在这里，我们描述了用于显微观察，三维重建和体积测量的水稻合子/融合配子中的精子细胞核的方案，其由体外受精系统产生（Uchiumi等人al。，2006; Uchiumi等人，2007）。本协议将适用于监测细胞分裂，分化，去分化和极性形成以及核型进展期间细胞中的核动力学。
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