| In vitro NLK Kinase Assay
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] This protocol provides step by step instructions to perform an in vitro kinase assay for nemo-like kinase. In addition, this protocol also describes an efficient method using mild lysis buffer for expression and purification of Glutathione S-transferase (GST) fusion proteins.
[摘要] 该协议提供了一步一步的指导，以进行nemo样激酶的体外激酶测定。 此外，该方案还描述了使用温和裂解缓冲液来表达和纯化谷胱甘肽S-转移酶（GST）融合蛋白的有效方法。
【背景】果蝇nemo已经被确定为在发育中的果蝇眼中光感受器簇的关键调节剂（Choi和Benzer，1994）。 据报道，nemo是不同物种间保守的。 该哺乳动物同系物是类似于Nemo的激酶（NLK）（Brott等人，1998; Rocheleau等人，1999）。 NLK是CMGC集团（CDK，MAPK，GSK3和CLK）的成员，也属于非典型的MAPK家族。 NLK通过转录因子调节多种细胞机制，所述转录因子包括在不同信号传导途径中的关键参与者TCF / LEF1，NICD和FOXO（Ishitani等人，1999; Ishitani等人， ，2010; Kim等人，2010）。 此外，最近我们已经将NLK鉴定为Yes相关蛋白（YAP）的新型激酶，YAP是Hippo途径中的共转录激活剂（Moon等人，2017）。 该协议描述了用于测量类似尼莫地来激酶活性的体外方法。
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| In vitro Dephosphorylation Assay of c-Myc
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Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract] This protocol describes experimental procedures for in vitro dephosphorylation assay of human protein c-Myc. This protocol can be adapted to detect phosphatase activity of other Ser/Thr phosphatases.
[摘要] 该方案描述了人蛋白质c-Myc的体外去磷酸化测定的实验程序。 该方案可适用于检测其他Ser / Thr磷酸酶的磷酸酶活性。
【背景】羧基末端结构域RNA聚合酶II多肽小型磷酸酶1（SCP1，也称为CTDSP1或NLI-IF）属于FCP / SCP磷酸酶家族，最初被报道使RNA聚合酶II的C-末端结构域（CTD）脱磷酸化 （Yeo等，2003）。 Smad2,3（Wrighton等，2006），Snail（Wu等，2009），PML（Lin等，2014）和c-Myc（Wang等，2016）也被鉴定为底物 的SCP1。
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| Ubiquitination Assay for Mammalian Cells
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Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract] Ubiquitin is an 8.5 kDa protein that can be activated and conjugated by ubiquitin-activating enzyme E1 and ubiquitin-conjugating enzyme E2, respectively. Ubiquitin E3 ligases then recognize protein substrates, and then transfer the ubiquitin from E2 to the targeted protein. This biological process is called ubiquitination, and it is an important biological process which can signal protein degradation via the proteasome. The aim of this protocol is to describe a procedure that determines the level of cellular ubiquitination in a protein-of-interest relative to control cells.
[摘要] 泛素是8.5kDa的蛋白质，其可以分别由泛素激活酶E1和泛素缀合酶E2激活和缀合。 然后泛素E3连接酶识别蛋白质底物，然后将泛素从E2转移到目标蛋白质。 这种生物过程称为泛素化，它是一个重要的生物过程，可以通过蛋白酶体信号蛋白降解。 该方案的目的是描述确定相对于对照细胞的目的蛋白质中的细胞泛素化水平的程序。
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