| Microscopic Observation of Subcellular GFP-tagged Protein Localization in Rice Anthers
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] This protocol demonstrates a simple method to determine the subcellular localization of fluorescence-tagged proteins on the vibratome sections of rice developing anthers. If a cell type-specific promoter is used to drive the tagged protein-encoding gene, the method enables to clearly distinguish the cells retaining fluorescent signals from other anther cells. It is applicable to both live and fixed samples, and presumably to other plant tissues.
[摘要] 该方案演示了一种确定荧光标记蛋白在水稻发育花药的振动切片上的亚细胞定位的简单方法。 如果使用细胞类型特异性启动子来驱动标记的蛋白质编码基因，该方法能够清楚地区分保留荧光信号的细胞与其他花药细胞。 它适用于活的和固定的样品，并且可能适用于其他植物组织。
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| Live Imaging of Axonal Transport in the Motor Neurons of Drosophila Larvae
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Axonal transport, which is composed of microtubules, motor proteins and a variety of types of cargo, is a prominent feature of neurons. Monitoring these molecular dynamics is important to understand the biological processes of neurons as well as neurodegenerative disorders that are associated with axonal dysfunction. Here, we describe a protocol for monitoring the axonal transport of motor neurons in Drosophila larvae using inverted fluorescence microscopy.
[摘要] 由微管，运动蛋白和各种类型的货物组成的轴突运输是神经元的突出特征。 监测这些分子动力学对于了解神经元的生物过程以及与轴突功能障碍相关的神经退行性疾病是重要的。 在这里，我们描述了使用倒置荧光显微镜监测果蝇幼虫中运动神经元的轴突运输的协议。
【背景】轴突是一种独特的神经元结构，神经元通过该结构将电信号和化学信号传递给邻近的神经元，肌肉和其他组织。通过囊泡，细胞器和材料的循环流动或穿梭来维持轴突功能（Liu等人，2012; Wong等人，2012; Alami等人，2014）。轴突功能障碍被认为是神经退行性病变的早期征兆，并且是人类中阿尔茨海默病，帕金森病和运动神经元疾病等神经退行性疾病的原因（Hirokawa等人，2010; Millecamps and Julien，2013）。然而，在人类和哺乳动物模型中难以监测这些神经退行性疾病中的轴突变性过程。果蝇模型是研究分子遗传水平的神经退行性疾病的有力工具，并通过体内神经元的实时成像为治疗方法提供了重要的证据（Shiba-福岛等人，2014; Hosaka等人，2017）。直立荧光显微镜技术通常用于分析组织和器官培养物的活体成像。然而，由于其广泛的实用性和可扩展性，倒置荧光显微镜已经看到需求增加。在这里，我们介绍我们的协议来分析使用倒置荧光显微镜的果蝇的第三龄幼虫的运动神经元的轴突运输。
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| Force Measurement on Mycoplasma mobile Gliding Using Optical Tweezers
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Author:
Date:
2017-02-05
[Abstract] Dozens of Mycoplasma species, belonging to class Mollicutes form a protrusion at a pole as an organelle. They bind to solid surfaces through the organelle and glide in the direction by a unique mechanism including repeated cycles of bind, pull, and release with sialylated oligosaccharides on host animal cells. The mechanical characters are critical information to understand this unique mechanism involved in their infectious process. In this protocol, we describe a method to measure the force generated by Mycoplasma mobile, the fastest gliding species in Mycoplasma. This protocol should be useful for the studies of many kinds of gliding microorganisms.
[摘要] 属于类 Mollicutes 的数十种支原体物种作为细胞器在极点形成突起。它们通过细胞器与固体表面结合，并通过独特的机制沿着方向滑动，包括在宿主动物细胞上重复的结合，拉伸和释放与唾液酸化寡糖的循环。机械特征是了解传染病过程中涉及到的独特机制的关键信息。在本协议中，我们描述了一种测量由支原体（Mycoplasma）中最快的滑翔物种支原体移动产生的力的方法。该方案对于许多种滑动微生物的研究应该是有用的。
背景 表面运动系统分布在许多细菌物种上，与细菌鞭毛和真核细胞运动蛋白相比并不能很好地阐明（Jarrell和McBride，2008），尽管它们可能给我们提供了解细菌生存策略的关键信息。为了阐明动力机制，我们需要关于机械结构，能量流动以及包括速度和力在内的机械特性的信息。光学镊子是用于在显微镜下在微米范围内的微观操作或力测量的特殊方法，通过该技术，具有与介质不同的衍射指数的物体被捕获在聚焦激光束的中心（Ashkin等人，1986）。这种方法大大有助于阐明肌球蛋白，动力蛋白和驱动蛋白的运动系统的特征，现在已经成为生物物理学领域的一个方法。在这里，我们根据我们的研究（Miyata等人，2002; Tanaka等人，2016），提供了如何测量表面移动微生物产生的力的方案，对于M的滑翔机制。移动类 Mollicutes ...
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