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Sucrose

蔗糖

Company: Sigma-Aldrich
Catalog#: S0389
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Mouse Satellite Cell Isolation and Transplantation
Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract]  Satellite cell (SC) transplantation represents a powerful strategy to investigate SC biology during muscle regeneration. We described here a protocol for SC isolation from green fluorescent protein (GFP)-expressing mice and their transplantation into murine muscles. This procedure was originally used to assess the effects of the hormone unacylated ghrelin on muscle regeneration, in particular evaluating how the increase of unacylated ghrelin in the recipient muscle affected the engraftment of donor SCs (Reano et al., 2017). [摘要]  卫星细胞(SC)移植代表了肌肉再生期间SC生物学研究的强大策略。 我们在这里描述了从绿色荧光蛋白(GFP)表达的小鼠和他们的小鼠肌肉移植SC分离的协议。 该程序最初用于评估激素非酰化生长素释放肽对肌肉再生的影响,特别是评估受体肌肉中未酰化的生长素释放肽的增加如何影响供体SC的植入(Reano等人,2017年)。

【背景】由分化的肌纤维组成的骨骼肌可以在受伤时再生。肌肉再生依赖于居住在肌肉纤维基底层之下的称为卫星细胞(SC)的静止驻留干细胞群(Mauro,1961)。受伤后,SC经历激活,广泛的增殖,分化和融合,最终修复或替换受损的肌纤维(Collins等人,2005)。

由于移植的成肌细胞可以与宿主成肌细胞融合,因此SC的移植被认为是杜氏肌营养不良症(DMD)的潜在疗法多年的时间,这提示了在缺陷纤维中功能性修复的可能性(Partridge ...

Targeted Genome Editing of Virulent Phages Using CRISPR-Cas9
Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract]  This protocol describes a straightforward method to generate specific mutations in the genome of strictly lytic phages. Briefly, a targeting CRISPR-Cas9 system and a repair template suited for homologous recombination are provided inside a bacterial host, here the Gram-positive model Lactococcus lactis MG1363. The CRISPR-Cas9 system is programmed to cleave a specific region present on the genome of the invading phage, but absent from the recombination template. The system either triggers the recombination event or exerts the selective pressure required to isolate recombinant phages. With this methodology, we generated multiple gene knockouts, a point mutation and an insertion in the genome of the virulent lactococcal phage p2. Considering the broad host range of the plasmids used ... [摘要]  该协议描述了一个直接的方法来产生严格裂解噬菌体的基因组中的特定突变。 简而言之,在细菌宿主(此处为革兰氏阳性模型乳酸乳球菌MG1363)内提供靶向CRISPR-Cas9系统和适合于同源重组的修复模板。 CRISPR-Cas9系统被编程为切割入侵噬菌体的基因组上存在的特定区域,但是缺少重组模板。 该系统触发重组事件或施加分离重组噬菌体所需的选择性压力。 利用这种方法,我们在毒性乳酸球菌噬菌体p2的基因组中产生了多个基因敲除,点突变和插入。 考虑到本协议中使用的质粒的广泛宿主范围,后者可以外推到其他噬菌体 - 宿主对。

【背景】噬菌体是在每个生态系统中发现丰富的细菌病毒(Suttle,2005; Breitbart and Rohwer,2005),毫不奇怪,它们是牛奶的天然居民。噬菌体p2是乳品工业中发现的强毒乳球菌噬菌体的最普遍组( Sk1virus )的模型(Deveau等人,2006; Mahony等人。,2012),它感染革兰氏阳性细菌乳酸乳球菌MG1363,也是基础研究的模式菌株。尽管p2作为参照噬菌体的地位,但几乎一半的基因编码未表征的蛋白质。同样,由宏基因组学确定的绝大多数噬菌体基因在公共数据库中没有功能分配和同系物(Hurwitz等人,2016; Paez-Espino等人, 2016)。

研究基因的方法之一是通过修饰和随后观察所得到的表型。噬菌体基因组只能在宿主内以其生物活性形式进行修饰。强毒噬菌体严格裂解;因此,它们的基因组从未整合到细菌染色体中。这为DNA的体内修饰增加了一个时间限制,只能在短的感染周期内对其进行操作。 ...

Chromatin Affinity Purification (ChAP) from Arabidopsis thaliana Rosette Leaves Using in vivo Biotinylation System
Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract]  Chromatin Affinity Purification (ChAP) is widely used to study chromatin architecture and protein complexes interacting with DNA. Here we present an efficient method for ChAP from Arabidopsis thaliana rosette leaves, in which in vivo biotinylation system is used. The chromatin is digested by Micrococcal Nuclease (MNase), hence the distribution of nucleosomes is also achieved. The in vivo biotinylation system was initially developed for Drosophila melanogaster (Mito et al., 2005), but the presented protocol has been developed specifically for Arabidopsis thaliana (Sura et al., 2017). [摘要]  染色质亲和纯化(ChAP)被广泛用于研究染色质结构和与DNA相互作用的蛋白质复合物。 在这里,我们提出了一种有效的从拟南芥莲座叶中ChAP的方法,其中使用了体内生物素化系统。 染色质被Micrococcal核酸酶(MNase)消化,因此核小体的分布也被实现。 体内生物素化系统最初是为黑腹果蝇而开发的(Mito et al。2005),但是所提出的方案是专门为 拟南芥(Sura et。,2017)。

【背景】染色质免疫沉淀(ChIP)成为研究染色质结构和组织的最重要和最常用的技术之一。但是,它需要高质量的抗体,不会与非特异性靶标发生交叉反应。在含有细胞壁并富含光合作用相关化合物和蛋白质的植物中,这是相当难以实现的,这些化合物和蛋白质经常引起交叉反应性问题。另一方面,获得稳定的转基因生物是植物常规和容易的策略。由于这些原因,大多数植物研究人员选择基因标签,获得融合蛋白,并用ChIP替代方法即染色质亲和纯化(ChAP)来研究染色质。 ChAP技术已被证明在植物染色质研究中非常有效(Zentner和Henikoff,2014)。此外,它通常比经典ChIP便宜,因为它不需要产生抗体,并且通常比ChIP更有效,因为标签以比直接针对感兴趣的蛋白质产生的抗体更高的亲和力被识别。 ...

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