| Intravenous Labeling and Analysis of the Content of Thymic Perivascular Spaces
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Following development in the thymus, T cells are thought to exit into the periphery predominantly through perivascular spaces (PVS). This exit route is used by conventional T cells, and likely also applies to unconventional T cell subsets, such as precursors of CD8αα and TCRγδ intraepithelial lymphocytes, regulatory T cells and natural killer T cells. Additional cell types might also be found in the PVS and initiate interactions with exiting T cells. The exact content of the PVS, and the processes within, are not well studied. To distinguish vascular from resident cells within various tissues by flow cytometry, intravenous (i.v.) labeling is becoming a commonly employed method. We recently used anti-CD45.2 antibodies and magnetic enrichment to further evaluate this technique, and compared ...
[摘要] 在胸腺发育后，T细胞被认为主要通过血管周围间隙（PVS）进入周边。 这种退路由常规T细胞使用，也可能适用于非常规T细胞亚群，例如CD8αα和TCRγδ上皮内淋巴细胞的前体，调节性T细胞和天然杀伤T细胞。 其他细胞类型也可能在PVS中发现并启动与退出T细胞的相互作用。 PVS的确切内容及其内部过程尚未得到充分研究。 为了通过流式细胞术将血管与各种组织中的驻留细胞区分开，静脉内（静脉内）标记正在成为常用方法。 我们最近使用抗CD45.2抗体和磁性富集来进一步评估这种技术，并比较胸腺和血液中的标记和未标记的细胞。 该测定可用于特异性研究胸腺PVS内的造血细胞亚群。
【背景】未成熟的胸腺细胞经历一系列成熟步骤，包括正向和负向选择，其消除了大部分发育中的T细胞。由此产生的成熟T细胞库因此形成朝向更高比例的有益克隆和减少比例的危险自反应克隆。胸腺还产生较少丰富的T细胞亚群，其通常用于维持免疫系统，组织和代谢稳态，包括：TCRγδ细胞，调节性T细胞（Treg），自然杀伤T细胞（NKT），上皮内淋巴细胞（IEL）和粘膜相关不变T（MAIT）细胞。成熟的胸腺细胞准备迁移到外周，上调表达识别鞘氨醇-1磷酸（S1P）的受体（S1PR1）的表达，S1P是血液中高浓度存在的脂质分子。 S1PR1 + T细胞沿着S1P梯度迁移并卷入血管循环中。
胸腺血管周围间隙（PVS）是实质和脉管系统之间的基膜分隔室。它们被认为促进了细胞的运输，特别是从胸腺移出的成熟T细胞（Mori等人，2007; ...
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| In vitro Antigen-presentation Assay for Self- and Microbial-derived Antigens
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] Antigen presenting cells (APC) are able to process and present to T cells antigens from different origins. This mechanism is highly regulated, in particular by Patter Recognition Receptor (PRR) signals. Here, I detail a protocol designed to assess in vitro the capacity of APC to present antigens derived from bacteria, apoptotic and infected apoptotic cells.
[摘要] 抗原呈递细胞（APC）能够处理和呈递来自不同来源的T细胞抗原。这种机制是高度调节的，特别是通过Patter Recognition Receptor（PRR）信号。在这里，我详细说明了一种设计用于评估体外的APC方案，用于展示来源于细菌，凋亡和感染的凋亡细胞的抗原。
背景 T细胞淋巴细胞在其表面上表达T细胞受体（TCR），其允许识别作为与主要组织相容性复合物（MHC）分子结合的抗原加工和呈递的抗原的细胞（自身）或微生物（非自身）抗原）呈递细胞（APC）。 APC能够处理抗原并将其呈递给T细胞，并且MHC-TCR相互作用是感染和自身免疫应答期间T细胞活化的关键步骤。
＆NBSP;以前的作品已经描述了基于刺激模式识别受体（PRR），例如toll样受体（TLR）（Blander和Medzhitov，2004和2006）的抗原呈递的调节机制。实际上，特异性地来自含有微生物病原体的吞噬体的TLR信号有利于在MHC-II分子内呈递非自身抗原。另一方面，凋亡细胞吞噬后产生的自身抗原由于不存在TLR刺激而导致溶酶体降解。然而，当两者都来自感染的凋亡细胞并且同时由相同的吞噬体携带时，自身和非自身抗原的分离不会发生，其由针对抗原呈递的TLR信号最佳地定制。已经使用骨髓来源的树突状细胞（BMDC）和凋亡性小鼠B细胞 - ...
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| Reconstitution of Lymphopaenic Mice with Regulatory and Conventional T cell Subsets
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Author:
Date:
2016-05-20
[Abstract] Transfer of mature T cells into immunodeficient mice results in sub-optimal reconstitution of the peripheral T cell pool. Under lymphopenic conditions, dendritic cells are released from tonic control by regulatory T cells (Tregs), and consequently drive activation and proliferation of low affinity T cells specific for endogenous antigens. This oligoclonal proliferation results in a T cell population dominated by T cells possessing an effector/memory phenotype and a limited TCR repertoire. Oligoclonal expansion can be prevented by selectively reconstituting the Treg compartment prior to T cell transfer (Bolton et al., 2015). Reconstitution of the Treg compartment of lymphopenic mice has been tested in immunodeficient mouse strains such as Rag-1-/-or Rag-2-/- ...
[摘要] 将成熟T细胞转移到免疫缺陷小鼠中导致外周T细胞库的次优重建。在淋巴细胞减少症状下，树突状细胞通过调节性T细胞（Tregs）从强直对照释放，并因此驱动对内源性抗原特异的低亲和力T细胞的激活和增殖。这种寡克隆增殖导致由具有效应/记忆表型和有限TCR库的T细胞支配的T细胞群。可以通过在T细胞转移之前选择性重建Treg区室来防止寡克隆扩增（Bolton等人，2015）。已经在免疫缺陷小鼠品系例如Rag-1 /或 Rag-2 -/- 中测试了淋巴细胞减少小鼠的Treg区室的重建。 小鼠，以及在通过致死性全身照射作为调节骨髓移植（BMT）的瞬时淋巴细胞减少的免疫小鼠中。将纯化的Treg转移到这些宿主中，结合用外源IL-2处理7天，足以重建Treg区室并减少树突细胞共刺激分子的表达，这是防止自身反应性T细胞不适当扩增的关键过程。在Treg重建后转移的T细胞不经历快速的自发增殖，而是进行慢的内稳态分裂以用天然T细胞重新增殖T细胞库，从而允许外周T细胞库的最佳重建。
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