| Assay for Assessing Mucin Binding to Bacteria and Bacterial Proteins
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Author:
Date:
2021-03-05
[Abstract] Legionella pneumophila, a Gram-negative bacterium and the causative agent of Legionnaires’ disease, exports over 300 effector proteins/virulence factors, through its type II (T2SS) and type IV secretion systems (T4SS). One such T2SS virulence factor, ChiA, not only functions as a chitinase, but also as a novel mucinase, which we believe aids ChiA-dependent virulence during lung infection. Previously published protocols manipulated wild-type L. pneumophila strain 130b and its chiA mutant to express plasmid-encoded GFP. Similarly, earlier studies demonstrated that wheat germ agglutinin (WGA) can be fluorescently labeled and can bind to mucins. In the current protocol, GFP-labeled bacteria were incubated with type II and type III porcine stomach mucins, which were then labeled with ...
[摘要] [摘要]嗜肺军团杆菌是革兰氏阴性细菌，是军团菌病的病原体，通过其II型（T2SS）和IV型分泌系统（T4SS）出口了300多种效应蛋白/毒力因子。一种这样的T2SS毒力因子ChiA不仅起几丁质酶的作用，而且还起新型粘蛋白酶的作用，我们认为它可以在肺部感染期间帮助ChiA依赖性毒力。以前发表的协议操纵野生型肺炎嗜血杆菌130b菌株及其chiA突变体，以表达质粒编码的GFP。同样，较早的研究表明，小麦胚芽凝集素（WGA）可以进行荧光标记，并可以与粘蛋白结合。 在当前方案中，将GFP标记的细菌与II型和III型猪胃粘蛋白孵育，然后用TexasRed标记的WGA进行标记，并通过流式细胞术进行分析，以测量在有或没有HLA的情况下细菌与粘蛋白的结合。内源性ChiA。另外，我们分析了纯化的ChiA与II型和III型猪胃粘蛋白的结合。该方案将细菌和直接蛋白结合到粘蛋白上，并且是第一个使用WGA和流式细胞术分析革兰氏阴性细菌与粘蛋白结合的方法。
图形摘要：
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评估细菌和蛋白质与粘蛋白结合的策略
[背景技术]嗜肺军团菌（LPN ），革兰氏阴性细菌，是军团病，肺炎的严重形式的病原体。L ...
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| Micropropagation of Prickly Pear by Axillary Shoot Proliferation
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] A protocol for the axillary bud proliferation of prickly pear (Opuntia; Cactaceae) is presented. This genus is widely used as a crop in the arid and semi-arid areas of the globe worldwide, providing numerous benefits for human and animal consumption. In vitro culture for axillary bud proliferation is of great use to obtain a large quantity of plants in a short period of time, with potential uses in production and for the preservation of endangered species of the Opuntia genus.
The optimal medium for Opuntia in vitro culture consists of Murashige and Skoog medium (MS) and L2 vitamins. To increase the yield of the axillary bud proliferation, we recommend the addition of plant growth regulators (PGRs). This work suggests a 15 d incubation in the ...
[摘要] 提出了刺梨（ Opuntia; Cactaceae ）腋芽增殖的方案。 该属广泛用作全球干旱和半干旱地区的作物，为人类和动物消费提供了许多益处。 腋芽增殖的体外培养对于在短时间内获得大量植物具有重要意义，可用于生产和保存罂粟的濒危物种 属。
仙人掌体外培养的最佳培养基由Murashige和Skoog培养基（MS）和L2维生素组成。 为了增加腋芽增殖的产量，我们建议添加植物生长调节剂（PGRs）。 这项工作表明在含有2.2mg / L苄基氨基嘌呤（BA）的培养基中培养15天，然后将外植体转移到不含PGR的培养基中。 我们还解释了如何使植物适应体外条件。
【背景】仙人掌（刺梨）属是仙人掌科家族的成员之一（Bravo-Hollis，1978）。虽然它原产于美洲，但目前生长在欧洲南部，非洲北部，澳大利亚，中东，西亚和世界其他地区的野生和商业种植园中（Ochoa和Barbera，1995; Kiesling和Metzing） ，2017）。仙人掌对干旱和半干旱环境以及生活在这些地区的人类群落产生了深远的影响，因为尽管在干旱地区生长，其生物量仍然很高（Acevedo et al。，1983）。在许多这样的领域， Opuntia 属被用于许多方面。 仙人掌的幼枝可以作为蔬菜食用;水果直接食用或加工成果冻，果汁或糖果（Barba et ...
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| Generation and Selection of Transgenic Olive Plants
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Olive (Olea europaea L.) is one of the most important oil crops in the Mediterranean basin. Biotechnological improvement of this species is hampered by the recalcitrant nature of olive tissue to regenerate in vitro. In previous investigations, our group has developed a reliable Agrobacterium-mediated transformation protocol using olive somatic embryos as explants (Torreblanca et al., 2010). Embryogenic cultures derived from radicles of matured zygotic embryos are infected with Agrobacterium tumefaciens, AGL1 strain, containing a binary plasmid with the gene of interest and the nptII selection gene. After a meticulous selection procedure, carried out using solid and liquid media supplemented with paromomycin, the putative transformed ...
[摘要] 橄榄油（Olea europaea L.）是地中海盆地最重要的石油作物之一。生物技术的改善受到橄榄组织在体外再生的顽固性质的阻碍。在以前的研究中，我们小组开发了一个可靠的土壤杆菌介导的转化方案，使用橄榄体细胞胚作为外植体（Torreblanca et al。，2010）。含有具有感兴趣基因和nptII选择基因的二元质粒的根瘤农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）AGL1菌株感染源自成熟合子胚胎胚根的胚性培养物。经过细致的选择程序，使用补充巴龙霉素的固体和液体培养基进行，建立推定的转化系。其转基因性质的初步确认是通过PCR扩增进行的。之后，可以通过有效的再生方案获得植物，其主要特征是使用低离子强度的矿物制剂，在液体培养基中用于培养物同步的阶段以及使用半渗透性乙酸纤维素膜进行胚胎成熟（Cerezo et al。 ，2011）。转基因插入的最终确认通过Southern或Northern分析使用再生植物的叶样品进行。
【背景】由Torreblanca等人开发的协议。 （2010）与Rugini等人（2000）开发的先前的橄榄转化协议有所不同，主要是外植体的种类，土壤杆菌菌株及其选择方法。 Rugini等人（2000）使用胚性质量作为外植体，将其在LBA4404农杆菌菌株的细菌悬浮液中温育48小时。感染后，将外植体在水中漂洗并在补充有250mg ...
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