| In vitro Co-culture of Mesenchymal Stem Cells and Endothelial Colony Forming Cells
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] The discovery of endothelial colony forming cells (ECFCs) with robust self-renewal and de novo vessel formation potentials suggests that ECFCs can be an excellent cell source for cardiovascular diseases treatment through improving neovascularization in the ischemic tissues. However, their engraftment after transplantation resulted to be low. Previous studies showed mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) could improve the survival and capillary formation capacity of ECFCs in co-culture systems. In this article, we describe a protocol for in vitro co-culture of MSCs and ECFCs to prime ECFCs for better engraftment.
[摘要] 发现具有强大自我更新和从头血管形成潜力的内皮细胞集落形成细胞（ECFCs）表明，ECFC可以通过改善缺血组织的新生血管形成，成为心血管疾病治疗的优良细胞来源。 然而，移植后的移植导致了低位移植。 以前的研究显示间充质干/基质细胞（MSC）可以改善共培养系统中ECFCs的存活和毛细管形成能力。 在这篇文章中，我们描述了体外协调MSCs和ECFCs共同培养ECFC以实现更好的移植。
【背景】内皮祖细胞（EPC）被定义为能够通过血管发生过程形成新血管的细胞群。 2004年，Ingram等人鉴定了来自人脐带血的称为“内皮细胞集落形成细胞（ECFC）”的离体培养物中的特异性高度增殖的EPC群体Ingram等人，2004），并且这些细胞最近被宣布代表EPCs（Medina等人，2017）。类似的群体也可以从具有等效血管化潜力和临床相关数量的人类胎盘组织中分离（Patel等人，2013; Shafiee等人，2015） ）。因此，ECFC移植已被提出作为缺血性疾病如心肌梗塞或关键性腿部缺血的治疗方法。然而，移植后的ECFCs植入物和血管生成潜力被证明是低的（Shafiee等人，2017; ...
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| Purification of FLAG-tagged Secreted Proteins from Mammalian Cells
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] This protocol describes a method for purifying glycosylated FLAG-tagged secreted proteins with disulfide bonds from mammalian cells. The purified products can be used for various applications, such as ligand binding assays.
[摘要] 该方案描述了一种用于从哺乳动物细胞中用二硫键纯化糖基化的FLAG标记的分泌蛋白的方法。 纯化的产物可用于各种应用，例如配体结合测定。
【背景】电子。大肠杆菌是从原核生物和真核生物生产重组蛋白质的首选生物之一。细菌表达系统的主要优点是生产率高，成本低。然而，成熟蛋白质对于功能分析是必需的（例如，配体结合测定）。大多数分泌的真核蛋白通过共价聚糖键和在内质网中形成二硫键进行翻译后修饰。这些共价修饰对于分泌的成熟蛋白的一般稳定性和折叠是必需的。因此，生产哺乳动物分泌蛋白质的最佳方法是使用哺乳动物宿主来确保经过适当的翻译后修饰的重组蛋白的产生。在以下方案中，我们已经描述了从哺乳动物细胞中纯化分泌蛋白质的详细程序。该方案用于生产标记有FLAG标签的蛋白质，但也适用于其他标记（例如，His标签）蛋白质的蛋白质。
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| Isolation and Analysis of Proteoglycans and Glycosaminoglycans from Archaeological Bones and Teeth
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] We have developed methods for isolating proteoglycans and glycosaminoglycans from archaeological bones and teeth. These methods have been previously published (Coulson-Thomas et al., 2015) and are described here in more detail. In the case of glycosaminoglycans, the method was a previously described method (Nader et al., 1999) which we optimized for archeological samples.
[摘要] 我们开发了从考古学骨骼和牙齿中分离蛋白聚糖和糖胺聚糖的方法。 以前已经公开了这些方法（Coulson-Thomas等人，2015），并且在这里更详细地描述。 在糖胺聚糖的情况下，该方法是先前描述的方法（Nader等人，1999），其针对考古样品进行了优化。
【背景】骨组织主要由矿物成分（羟基磷灰石）和由胶原，非胶原蛋白和蛋白聚糖（PG）组成的有机基质组成。 由于与羟基磷灰石紧密结合，细胞外基质蛋白和PG被保护免受死亡后温度和化学药剂的破坏作用。 然而，到目前为止，只有DNA和蛋白质已经从考古学骨骼中成功提取，因此我们开发了从考古学骨骼和牙齿中分离PG和糖胺聚糖（GAG）链的方法。 PGs和GAG在骨形态发生，体内平衡和退行性骨病中起主要作用，从考古骨骼分析这些分子将揭示有价值的古生物学信息。
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