| Liposome Flotation Assay for Studying Interactions Between Rubella Virus Particles and Lipid Membranes
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Rubella virus (RuV) is an enveloped, positive-sense single-stranded RNA virus that is pathogenic to humans. RuV binds to the target cell via the viral envelope protein E1, but the specific receptor molecules on the target cell are yet to be fully elucidated. Here, we describe a protocol for liposome flotation assay to study direct interactions between RuV particles and lipid membranes in a qualitative manner. Interactions are examined by a Nycodenz density gradient fractionation using UV-inactivated RuV particles and fluorescent-labeled liposomes consisting of pure lipids. Fractionated RuV particles are detected using standard sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) followed by Western blot analysis for viral proteins. On the Nycodenz gradient, RuV particles ...
[摘要] 风疹病毒（RuV）是一种包膜的正义单链RNA病毒，对人类具有致病性。 RuV通过病毒包膜蛋白E1与靶细胞结合，但靶细胞上的特异性受体分子尚未完全阐明。在这里，我们描述了脂质体浮选测定的方案，以定性方式研究RuV颗粒和脂质膜之间的直接相互作用。使用UV-灭活的RuV颗粒和由纯脂质组成的荧光标记的脂质体通过Nycodenz密度梯度分级检查相互作用。使用标准十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测分级的RuV颗粒，然后对病毒蛋白进行Western印迹分析。在Nycodenz梯度上，与未结合的RuV颗粒相比，与脂质体结合的RuV颗粒转移至较低密度的部分。使用该方案，我们提供了令人信服的证据，即在中性pH下以钙依赖性方式，RuV颗粒与某些细胞类型中含有鞘磷脂（SM）和胆固醇的脂质膜结合。
【背景】 风疹病毒是“风疹”的致病因子，“风疹”是一种急性且相对轻微的全身性感染和“先天性风疹综合征”，一种导致严重出生缺陷的转胎胎儿感染（Hobman，2013）。阐明RuV进入的分子机制对于了解病毒病理学和帮助开发抗RuV药物是必不可少的。虽然以前的研究表明宿主细胞的膜脂质作为RuV受体（Mastromarino et al。，1989和1990; DuBois et ...
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| Live Imaging of Axonal Transport in the Motor Neurons of Drosophila Larvae
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Axonal transport, which is composed of microtubules, motor proteins and a variety of types of cargo, is a prominent feature of neurons. Monitoring these molecular dynamics is important to understand the biological processes of neurons as well as neurodegenerative disorders that are associated with axonal dysfunction. Here, we describe a protocol for monitoring the axonal transport of motor neurons in Drosophila larvae using inverted fluorescence microscopy.
[摘要] 由微管，运动蛋白和各种类型的货物组成的轴突运输是神经元的突出特征。 监测这些分子动力学对于了解神经元的生物过程以及与轴突功能障碍相关的神经退行性疾病是重要的。 在这里，我们描述了使用倒置荧光显微镜监测果蝇幼虫中运动神经元的轴突运输的协议。
【背景】轴突是一种独特的神经元结构，神经元通过该结构将电信号和化学信号传递给邻近的神经元，肌肉和其他组织。通过囊泡，细胞器和材料的循环流动或穿梭来维持轴突功能（Liu等人，2012; Wong等人，2012; Alami等人，2014）。轴突功能障碍被认为是神经退行性病变的早期征兆，并且是人类中阿尔茨海默病，帕金森病和运动神经元疾病等神经退行性疾病的原因（Hirokawa等人，2010; Millecamps and Julien，2013）。然而，在人类和哺乳动物模型中难以监测这些神经退行性疾病中的轴突变性过程。果蝇模型是研究分子遗传水平的神经退行性疾病的有力工具，并通过体内神经元的实时成像为治疗方法提供了重要的证据（Shiba-福岛等人，2014; Hosaka等人，2017）。直立荧光显微镜技术通常用于分析组织和器官培养物的活体成像。然而，由于其广泛的实用性和可扩展性，倒置荧光显微镜已经看到需求增加。在这里，我们介绍我们的协议来分析使用倒置荧光显微镜的果蝇的第三龄幼虫的运动神经元的轴突运输。
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| Phototaxis Assay for Chlamydomonas reinhardtii
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Phototaxis is a behavior in which organisms move toward or away from the light source (positive or negative phototaxis, respectively). It is crucial for phototrophic microorganisms to inhabit under proper light conditions for phototaxis. The unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii rapidly changes its swimming direction upon light illumination, and thus is a nice model organism for phototaxis research. Here we show two methods to assay Chlamydomonas phototaxis; one is a quick, easy and qualitative analysis, so-called the dish assay; and the other is a quantitative single-cell analysis.
[摘要] 光趋向性是一种生物朝向或远离光源（分别为正或负光趋势）移动的行为。 光合微生物在光照条件适宜的条件下居住是至关重要的。 单细胞藻类莱茵衣藻在光照下迅速改变其游泳方向，因此是光线研究的一个很好的模型生物。 我们在这里展示了两种测定衣藻感染的方法; 一个是快速，容易和定性的分析，所谓的盘测定; 另一个是定量单细胞分析
【背景】单细胞藻类莱茵衣藻被用作各种研究领域的示范生物，包括微生物光合作用，光合作用和睫毛/鞭毛运动（Hegemann and Berthold，2009）。衣藻细胞在其眼窝感觉到光，观察细胞器作为位于细胞赤道附近的橙色斑点。眼窝包含位于细胞膜中的光感受器蛋白质通道视紫质和富含类胡萝卜素的颗粒层，其作用于光反射器之后的通道视紫质。由于它们的相对位置，眼睛受到高度定向的光感受，细胞可以准确地检测光照的方向（Foster和Smyth，1980; Ueki等，2016）。在光接收时，两个鞭毛改变它们的跳动平衡，并且细胞改变其游泳方向朝向或远离光源。
衣原体光镜方向（或“符号”）由细胞还原氧化态调节，其受细胞代谢如光合作用和呼吸活动的影响（Wakabayashi等，2011）。因此，光照标记间接地反映了体内的这些活性。例如，显示快速光敏反应的突变体已被证明具有高的光合活性（Kim等，2016）。此外，为了调节鞭毛打击细胞的光动力转动，鞭毛动力蛋白应严格调节（Kamiya和Witman，1984; ...
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