| Dissection and Whole Mount Staining of Retina from Neonatal Mice
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Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract] Here we provide a detailed protocol for whole mount staining of mouse retina. This protocol was used to analyze retinal angiogenesis in newborn mice (Sawaguchi et al., 2017) by modifying the original protocols (Powner et al., 2012; Tual-Chalot et al., 2013). This protocol can also be used for whole mount staining of adult retina.
[摘要] 在这里，我们提供了小鼠视网膜整体染色的详细方案。 该方案用于分析新生小鼠的视网膜血管生成（Sawaguchi et al。，2017），修改原始方案（Powner et al。，2012; Tual-Chalot et al。，2013）。 该方案也可用于成人视网膜的整体染色。
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| Analysis of the Effect of Sphingomyelinase on Rubella Virus Infectivity in Two Cell Lines
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Rubella is a mildly contagious disease characterized by low-grade fever and a morbilliform rash caused by the rubella virus (RuV). Viruses often use cellular phospholipids for infection. We studied the roles of cellular sphingomyelin in RuV infection. Treatment of cells with sphingomyelinase (SMase) inhibited RuV infection in rabbit kidney-derived RK13 cells and African green monkey (Cercopithecus aethiops) kidney-derived Vero cells. Our data further demonstrated that RuV used cellular sphingomyelin and cholesterol for its binding to cells and membrane fusion at the step of virus entry. Detailed protocols of our assays, which assess the effects of SMase treatment on RuV infectivity in RK13 and Vero cells, are described.
[摘要] 风疹是一种轻度传染性疾病，其特征是低风热和由风疹病毒（RuV）引起的麻疹样皮疹。 病毒通常使用细胞磷脂进行感染。 我们研究了细胞鞘磷脂在RuV感染中的作用。 用鞘磷脂酶（SMase）处理细胞抑制兔肾衍生的RK13细胞和非洲绿猴（ Cercopithecus aethiops ）肾源性Vero细胞中的RuV感染。 我们的数据进一步证明RuV在病毒进入的步骤中使用细胞鞘磷脂和胆固醇来结合细胞和膜融合。 描述了我们的测定的详细方案，其评估了SMase处理对RK13和Vero细胞中RuV感染性的影响。
【背景】风疹病毒（RuV）是一种正链RNA病毒，属于 Togaviridae 家族中的 Rubivirus 属。该家族有两个属， Rubivirus 和 Alphavirus 。风疹病毒是属的鞋底构件的风疹病毒，而许多病毒，例如塞姆利基森林病毒（SFV）和辛德毕斯病毒（SINV），是归类于甲病毒属。 RuV是风疹和先天性风疹综合征（CRS）的致病因子。风疹的特征是低烧，麻疹样皮疹和淋巴结肿大。它通常是一种轻微的疾病。然而，CRS是一种严重的疾病。 CRS导致在怀孕早期患有风疹的母亲所生的新生儿出现多器官缺陷。白内障，感音神经性听力损失和心血管缺陷在CRS中很常见。
以前的研究表明，细胞膜脂质作为RuV感染的结合或进入因子（Mastromarino ...
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| Isolation of Murine Brain and Lung Microvascular Endothelial Cells
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] This protocol describes how to isolate murine endothelial cells from newborn mice brain and 3-month-old mice lung by modifying the original protocols (Sobczak et al., 2010; Ruck et al., 2014). We have used the protocol to analyze mRNA expression level in brain endothelial cells (Sawaguchi et al., 2017). Isolated lung endothelial cells were expanded in vitro for various downstream experiments such as gene expression analysis and cell-based signaling assay.
[摘要] 该协议描述了如何通过修改原始方案从新生小鼠脑和3个月大的小鼠肺中分离鼠内皮细胞（Sobczak et al。，2010; Ruck et al。，2014）。 我们使用该方案分析脑内皮细胞中的mRNA表达水平（Sawaguchi et al。，2017）。 分离的肺内皮细胞在体外扩增用于各种下游实验，例如基因表达分析和基于细胞的信号传导测定。
【背景】 该方案描述了从小鼠脑和肺中分离鼠内皮细胞的实验程序。 我们使用新生小鼠使用抗CD31抗体分离脑内皮细胞。 使用该方案，可以从脑内皮细胞中分离出适合于基因表达分析的2μg总RNA，尽管不能完全消除周细胞和星形胶质细胞。 我们还使用3个月大的小鼠肺使用抗CD31和抗CD102抗体分离肺内皮细胞。 将分离的肺内皮细胞在体外6cm培养皿中扩增，并用于各种下游实验，例如基因表达分析和基于细胞的信号传导测定。
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