| Long-term in vitro Culture of Cryptosporidium parvum
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Continuous in vitro growth of Cryptosporidium parvum has proved difficult and conventional in vitro culture techniques result in short-term (2-5 days) growth of the parasite resulting in thin-walled oocysts that fail to propagate using in vitro cultures, and do not produce an active infection using immunosuppressed or immunodeficient mouse models (Arrowood, 2002). Here we describe the use of hollow fiber bioreactors (HFB) that simulate in vivo conditions by providing oxygen and nutrients to host intestinal cells from the basal surface and permit the establishment of a low redox, high nutrient environment on the apical surface. When inoculated with 105 C. parvum (Iowa isolate) oocysts the bioreactor produced 108 ...
[摘要] Cryptosporidium parvum 的连续体外生长已证明是困难的，并且常规体外培养技术导致短期（2-5天）生长寄生虫导致薄壁卵囊不能使用体外培养物繁殖，并且不使用免疫抑制或免疫缺陷小鼠模型产生活跃感染（Arrowood，2002）。在这里，我们描述了中空纤维生物反应器（HFB）的使用，通过提供氧气和营养物质从基础表面宿主肠细胞模拟体内条件，并允许建立低氧化还原，高营养环境顶面。当接种10 5 C时。 parvum （爱荷华州分离物）卵囊生物反应器在14天后每ml产生10个 8 卵囊（20ml额外毛细血管体积），并保持2年以上。使用TCR-α免疫缺陷小鼠模型的体内感染性研究显示，在6,12和18个月时从生物反应器产生的卵囊与用于启动培养的亲本Iowa分离物无法区分。 HFB产生的卵囊具有与亲本爱荷华分离物类似的百分比分析。
【背景】 Cryptosporidium parvum 是人和其他哺乳动物肠道的细胞内专性寄生虫，导致急性腹泻。该疾病在免疫功能正常的个体中是自限性的，然而，在免疫功能低下的成人和幼儿中，该疾病可能危及生命（Kotloff，2017）。它是经济资源低的国家中三种被诊断出的儿童肠道疾病之一（Kotloff et al。，2013; Sow et ...
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| Isolation of LYVE-1+ Endothelial Cells from Mouse Embryos
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Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1, or LYVE-1, is a type 1 integral membrane glycoprotein expressed by lymphatic endothelial cells (LECs). LYVE-1 is commonly used as a biological marker to visually distinguish developing lymphatic vessels from blood endothelial cells (arteries or veins). As our understanding of lymphatic biology is still lacking today, the need to isolate LECs apart from other endothelial cells has taken on greater importance. The following procedure describes a magnetic bead separation procedure for isolating LEC-rich populations of cells from developing mouse embryos.
[摘要] 淋巴管内皮透明质酸受体1或LYVE-1是由淋巴管内皮细胞（LEC）表达的1型整合膜糖蛋白。 LYVE-1通常用作生物标记物，以在视觉上区分发育中的淋巴管与血液内皮细胞（动脉或静脉）。 由于我们今天仍然缺乏对淋巴生物学的理解，因此将LEC与其他内皮细胞分离的必要性变得更加重要。 以下程序描述了用于从发育中的小鼠胚胎中分离富含LEC的细胞群的磁珠分离程序。
【背景】淋巴脉管系统形成二次循环系统，其起到从组织排出细胞外液的作用，允许脂质的转运，并提供免疫细胞运输和运输功能。虽然我们对淋巴系统的理解在过去的几十年中迅速扩大，但与我们对动脉和静脉生物学的了解相比，它仍然缺乏。 LECs鉴定LYVE-1受体表达提供了区分淋巴组织的有用工具，但已知LYVE-1在其他组织中表达，包括肝和脾窦状细胞和胰腺外分泌和朗格汉斯细胞胰岛（Banerji et al。，1999）。由LYVE1基因编码，LYVE-1受体的生物学功能尚未确定，但除了跨内皮细胞的HA转运外，还有人建议参与肿瘤转移（Jackson，2003）。尽管LYVE-1在多种组织中表达，但它仍然是目前用于区分LEC与其他内皮细胞的常用标记物。该方法的目的是使用与LYVE-1抗体偶联的dynabeads以正选择方法从发育中的小鼠胚胎中分离LEC。
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| Assessing the Efficacy of Small Molecule Inhibitors in a Mouse Model of Persistent Norovirus Infection
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] Human norovirus is the most common cause of acute gastroenteritis worldwide, resulting in estimated mortality of ~210,000 each year, of whom most are children under the age of five. However, norovirus can infect people of all age groups. There is a risk of prolonged infection in children, the elderly and patients who are immunocompromised. To study the inhibition of persistent norovirus replication by small molecule antivirals in vivo, we used a murine norovirus CR6 strain (MNV.CR6). We demonstrated earlier that efficient small molecules can reduce viral shedding in the stool of infected mice. Here we present how to generate the MNV.CR6 virus stock, infect type I and II interferon receptor knockout AG129 mice via oral gavage, administer antivirals to mice, and quantify viral ...
[摘要] 人类诺瓦克病毒是全球急性胃肠炎最常见的原因，估计每年约有210,000人死亡，其中大部分是5岁以下的儿童。 然而，诺如病毒可以感染所有年龄组的人。 儿童，老年人和免疫功能低下的患者有长期感染的风险。 为研究体内小分子抗病毒剂对持续诺如病毒复制的抑制作用，我们使用鼠诺沃克病毒CR6株（MNV.CR6）。 我们之前表明，高效小分子可以减少感染小鼠粪便中的病毒脱落。 在这里，我们介绍如何产生MNV.CR6病毒，通过口服灌胃感染I型和II型干扰素受体敲除AG129小鼠，给小鼠施用抗病毒药物，并量化这些小鼠粪便中的病毒基因组拷贝。
【背景】人诺瓦克病毒是胃肠炎的重要原因。尽管大多数诺罗病毒感染是急性和自限性的，但是在具有免疫缺陷状态的患者中，尤其是在实体器官和造血干细胞移植受体，接受化疗的患者和患有AIDS的患者中，感染可能变成慢性的（Westhoff等人， / em>，2009; Green，2014; Angarone 等。，2016）。在幼儿和老年人中也观察到延长的诺如病毒感染，导致疾病持续时间增加，排便增加和病毒脱落长达47天（Murata等人，2007; ...
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