| GUS Staining of Guard Cells to Identify Localised Guard Cell Gene Expression
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Determination of a gene expression in guard cells is essential for studying stomatal movements. GUS staining is one means of detecting the localization of a gene expression in guard cells. If a gene is specially expressed in guard cells, the whole cotyledons or rosette leaf can be used for GUS staining. However, if a gene is expressed in both mesophyll and guard cells, it is hard to exhibit a clear expression of the gene in guard cells by a GUS staining image from leaf. To gain a clear guard cell GUS image of small G protein ROP7, a gene expressed in both mesophyll and guard cells, we peeled the epidermal strips from the leaf of 3-4 week-old plants. After removing the mesophyll cells, the epidermal strips were used for GUS staining. We compared the GUS staining images from ...
[摘要] 保卫细胞中基因表达的测定对于研究气孔运动至关重要。 GUS染色是检测保卫细胞中基因表达定位的一种手段。如果在保卫细胞中特异性表达基因，则可以将整个子叶或玫瑰花叶用于GUS染色。然而，如果在叶肉和保卫细胞中表达基因，则难以通过来自叶的GUS染色图像在保护细胞中表达该基因的清楚表达。为了获得清晰的保护细胞GUS图像的小G蛋白ROP7 ，一种在叶肉和保卫细胞中表达的基因，我们从3-4周龄的植物的叶片剥离表皮条。去除叶肉细胞后，将表皮条用于GUS染色。我们比较了来自表皮条或小G蛋白ROP7和/或RopGEF4的叶片的GUS染色图像，其是在保卫细胞中特异性表达的基因，并且发现提供了表皮条带的GUS染色显示在叶肉和保卫细胞中表达的基因的保卫细胞表达的良好方法。该方案适用于在拟南芥保卫细胞中表达的任何基因，或表皮条可以容易地从叶上剥离的其它植物。
【背景】气孔运动调节植物和环境之间的气体交换，因此，重要的是揭示气孔的开启或关闭的机制。确定基因的保卫细胞表达对于研究其在气孔运动中的作用至关重要。鉴定基因在保卫细胞中的表达有几种方法。一种方法是通过RT-PCR（Jeon等人，2008; Takimiya等人，2013）检查保卫细胞中基因的RNA表达。为此，需要分离叶肉和保卫细胞的原生质体。另一种方法是检查表达由基因天然启动子驱动的GUS的转基因植物的保卫细胞中的GUS ...
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| Analysis of in vivo Cellulose Biosynthesis in Arabidopsis Cells by Spinning Disk Confocal Microscopy
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Author:
Date:
2015-10-05
[Abstract] Cellulose is a main component of plant cell walls. Tools to analyze cellulose mainly rely on analytical chemistry, which yields information about cellulose amounts and structure, but cannot be applied to intact tissues. Moreover, these methods measure total cellulose and cannot be used to assay cellulose synthesis per se. Live cell imaging of the catalytic subunits of the cellulose synthesis complex (CSC) conjugated to fluorescent proteins is an important tool to understand the dynamics of the cellulose biosynthesis process (Paredez et al., 2006). This method can be used in various genetic backgrounds (Sorek et al., 2014) or with different chemical inhibitors (Brabham and Debolt, 2012). Here we describe in detail the procedure to visualize the movement of CSCs ...
[摘要] 纤维素是植物细胞壁的主要成分。用于分析纤维素的工具主要依赖于分析化学，其产生关于纤维素量和结构的信息，但不能应用于完整组织。此外，这些方法测量总纤维素，并且不能用于测定纤维素合成本身。与荧光蛋白结合的纤维素合成复合物（CSC）的催化亚基的活细胞成像是理解纤维素生物合成过程的动力学的重要工具（Paredez等人，2006）。该方法可用于各种遗传背景（Sorek等人，2014）或使用不同的化学抑制剂（Brabham和Debolt，2012）。在这里我们详细描述的过程可视化CSCs在质膜的运动。由于CSC的运动可能是由葡聚糖合成和挤出进入细胞壁引起的，因此CSC速度的活细胞分析提供了一种直接测量体内纤维素合成的方法。
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